2) ДНК-гиразу
3) АТФазу
4) коллагеназу (+)
При microdissection testicular sperm extraction (мTESE, MD-TESE) из ткани яичка извлекают отдельные расширенные или непрозрачные семенные канальцы, после чего материал измельчают и исследуют под микроскопом для поиска сперматозоидов. Добавление коллагеназы облегчает ферментативную диссоциацию ткани: фермент расщепляет коллагеновые компоненты межклеточного матрикса и базальных мембран, разделяет плотные участки семенных канальцев и повышает доступность их содержимого для последующего микроскопического поиска.
Коллагеназа используется как вспомогательный этап обработки биопсийного материала, обычно после микрохирургического выделения канальцев и механического измельчения. Она не создаёт сперматозоиды и не служит специфическим маркером сперматогенеза, а только улучшает высвобождение клеточных элементов, включая возможные зрелые сперматозоиды. После ферментативной обработки эмбриолог оценивает суспензию в нативном препарате; найденные сперматозоиды могут быть использованы для интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).
Липаза предназначена преимущественно для расщепления липидов, ДНК-гираза является бактериальным ферментом, участвующим в изменении топологии ДНК, а АТФаза гидролизует АТФ и не предназначена для разрушения соединительнотканного матрикса. Поэтому ни один из этих ферментов не обеспечивает необходимую диссоциацию ткани яичка. Правильный ответ — коллагеназа.
| Этап или признак | Основное воздействие | Значение при MD-TESE |
|---|---|---|
| Микрохирургическое выделение канальцев | Выбор участков ткани с визуальными признаками сохранённого сперматогенеза | Снижает объём удаляемой ткани и повышает вероятность обнаружения сперматозоидов |
| Механическое измельчение | Разделение семенных канальцев и освобождение клеточного содержимого | Первичный способ подготовки материала к микроскопии |
| Коллагеназа | Расщепление коллагена межклеточного матрикса и компонентов базальной мембраны | Улучшает ферментативную диссоциацию ткани и высвобождение сперматозоидов |
| Микроскопический поиск | Оценка суспензии на наличие зрелых сперматозоидов и их подвижности | Определяет возможность использования клеток для ИКСИ или криоконсервации |
| Гистологическая оценка | Выявление гипосперматогенеза, синдрома только клеток Сертоли или герминативно-клеточной аплазии | Помогает объяснить причину необструктивной азооспермии и прогнозировать результат TESE |
| Липаза | Гидролиз триглицеридов и других липидов | Не обеспечивает расщепление коллагенового каркаса ткани яичка и не является стандартным компонентом обработки |
| ДНК-гираза и АТФаза | Ферменты, связанные соответственно с топологией бактериальной ДНК и энергетическим обменом | Не применяются для диссоциации семенных канальцев при поиске сперматозоидов |
Наиболее высокая клиническая значимость MD-TESE отмечается при необструктивной азооспермии, когда очаги сперматогенеза могут сохраняться в отдельных канальцах. Результат зависит не только от ферментативной обработки, но и от причины азооспермии, гормонального статуса, объёма ткани и опыта микрохирургической и эмбриологической команды. Избыточная экспозиция коллагеназы нежелательна, поскольку может повреждать клеточные структуры и снижать жизнеспособность сперматозоидов. Окончательное решение о пригодности найденных клеток принимается после их морфологической и функциональной оценки.