2) доноров крови
3) здоровых лиц
4) носителей ВИЧ
Отрицательный контроль должен представлять собой сыворотку, в которой лабораторно подтверждено отсутствие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2. При постановке иммуноферментного анализа такой образец проходит все стадии реакции одновременно с исследуемыми пробами и должен формировать минимальный оптический сигнал, соответствующий нерективному результату. В зарегистрированных тест-системах отрицательные контроли также характеризуются как нормальная человеческая сыворотка или плазма, отрицательная по антителам к ВИЧ.
Основная функция отрицательного контроля — оценка фонового окрашивания и выявление неспецифического связывания компонентов конъюгата с антигенами, сорбированными на твердой фазе. Повышенная оптическая плотность контрольной отрицательной сыворотки может указывать на нарушение режима промывки, контаминацию реагентов, ошибки дозирования или непригодность набора. В зависимости от конструкции тест-системы значение отрицательного контроля используется для проверки валидности постановки и может участвовать в расчёте пороговой оптической плотности.
Обозначения донорская сыворотка или сыворотка здорового человека сами по себе недостаточны: решающим критерием является документированная нерективность образца по отношению к определяемым маркерам. Клиническое благополучие не исключает раннюю или бессимптомную ВИЧ-инфекцию, а донорское происхождение не заменяет валидацию контрольного материала. Сыворотка человека с ВИЧ-инфекцией содержит специфические антитела и может применяться как положительный, но не как отрицательный контроль.
| Контрольный материал | Характеристика | Ожидаемый результат | Назначение |
|---|---|---|---|
| Отрицательная контрольная сыворотка | Подтверждённое отсутствие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 | Оптическая плотность ниже допустимого предела | Оценка фона и неспецифического связывания |
| Положительная контрольная сыворотка | Содержит специфические антитела к антигенам ВИЧ | Оптическая плотность выше установленного порога | Подтверждение активности антигенов и конъюгата |
| Калибратор порогового уровня | Материал с заданной реактивностью | Сигнал в установленном производителем диапазоне | Определение или проверка порогового значения теста |
| Реагентный бланк | Реакционная смесь без исследуемой сыворотки | Минимальный или отсутствующий сигнал | Контроль собственной оптической плотности реагентов |
| Внешний контроль качества | Независимый образец с известным статусом | Соответствие аттестованному результату | Оценка воспроизводимости метода и работы лаборатории |
| Исследуемая проба | Сыворотка или плазма обследуемого лица | Сравнивается с пороговым значением | Предварительное определение реактивности по антителам к ВИЧ |
Постановка ИФА считается достоверной только при соответствии результатов всех контролей критериям, указанным производителем тест-системы. Нерективный отрицательный контроль подтверждает, что наблюдаемый сигнал в исследуемой пробе не обусловлен общим фоном реакции. Реактивный результат скринингового исследования не является самостоятельным окончательным диагнозом и требует дальнейшего лабораторного подтверждения по утверждённому диагностическому алгоритму. Контрольные образцы при этом необходимо рассматривать как потенциально инфекционный биологический материал и обрабатывать с соблюдением требований биологической безопасности.