2) РИФ
3) ИФА
4) NASBA (+)
NASBA (nucleic acid sequence-based amplification) — молекулярно-биологический метод изотермической амплификации нуклеиновых кислот, преимущественно РНК. Реакция проводится при постоянной температуре и включает последовательную работу обратной транскриптазы, РНКазы H и РНК-полимеразы. В результате из молекулы-мишени образуется большое количество РНК-копий, которые выявляют с помощью специфических зондов.
Метод применяют для обнаружения генетического материала возбудителей инфекций, передаваемых половым путём, включая микроорганизмы с клинически значимыми РНК-мишенями. Высокая аналитическая чувствительность позволяет выявлять инфекционный агент даже при небольшой концентрации в исследуемом материале. В отличие от NASBA, иммуноферментный, иммунохемилюминесцентный анализ и реакция иммунофлуоресценции основаны на взаимодействии антигена с антителом и не обеспечивают амплификацию нуклеиновых кислот.
| Метод | Определяемая мишень | Основной принцип | Относится к амплификации нуклеиновых кислот |
|---|---|---|---|
| NASBA | Преимущественно РНК возбудителя | Изотермическое многократное копирование последовательности с участием трёх ферментов | Да |
| ПЦР | ДНК; после обратной транскрипции — РНК | Циклическая температурная амплификация заданного участка нуклеиновой кислоты | Да |
| Транскрипционно-опосредованная амплификация | РНК или ДНК | Изотермическое образование большого числа РНК-ампликонов | Да |
| ИФА | Антигены возбудителя или специфические антитела | Иммуноферментная регистрация реакции антиген–антитело | Нет |
| РИФ | Антигены микроорганизма | Выявление иммунных комплексов с помощью флуоресцентной метки | Нет |
| ИХЛ | Антигены или антитела | Иммунологическая реакция с хемилюминесцентной регистрацией сигнала | Нет |
Результат NASBA свидетельствует о наличии специфической последовательности нуклеиновой кислоты возбудителя, а не об иммунном ответе организма. При использовании РНК-мишеней метод может преимущественно выявлять метаболически активные микроорганизмы, поскольку РНК менее стабильна, чем ДНК. Диагностическая значимость исследования зависит от правильного выбора биоматериала, соблюдения условий его транспортировки и предотвращения контаминации. Интерпретацию результата проводят с учётом клинической картины и эпидемиологического анамнеза.