2) сыворотку
3) клетки периферической крови (+)
4) плазму
Реакция бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ, LTT) представляет собой ex vivo-метод оценки пролиферативного ответа сенсибилизированных Т-лимфоцитов на специфический аллерген, лекарственный препарат или другой антиген. Для исследования необходимы жизнеспособные мононуклеарные клетки, которые получают из венозной периферической крови, обычно в пробе с антикоагулянтом. После инкубации со стимулятором активированные лимфоциты увеличиваются в размерах, синтезируют ДНК и переходят в состояние бластной трансформации.
Метод преимущественно отражает клеточно-опосредованные иммунные реакции, включая гиперчувствительность замедленного типа (IV тип по классификации Джелла и Кумбса), что особенно важно при оценке лекарственной и контактной аллергии. Сыворотка и плазма не содержат интактных жизнеспособных лимфоцитов, способных к пролиферации, поэтому не могут служить основным материалом для РБТЛ. Пунктат или тканевой биоптат иногда могут содержать лимфоидные клетки, однако их клеточный состав, количество и жизнеспособность вариабельны; для стандартного системного исследования используют именно клетки периферической крови.
Результат оценивают по степени пролиферации в ответ на специфический стимул по сравнению с отрицательным контролем; применяют, например, индекс стимуляции, включение меченого тимидина, окрашивание CFSE или определение экспрессии Ki-67 методом проточной цитометрии. Обязательны отрицательный и положительный контроли, поскольку снижение жизнеспособности клеток, неспецифическая активация и влияние лекарственной терапии могут искажать результат. Положительная реакция свидетельствует о наличии клеточной сенсибилизации, но сама по себе не доказывает клинически значимую аллергию.
| Материал или этап исследования | Что оценивается | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Мононуклеарные клетки периферической крови | Жизнеспособные Т-лимфоциты и их пролиферация после стимуляции | Основной биологический материал для РБТЛ |
| Сыворотка | Растворимые антитела, цитокины и другие гуморальные факторы | Не содержит клеток, способных к бластной трансформации; для прямого проведения РБТЛ не используется |
| Плазма | Растворимые компоненты крови с сохранёнными факторами свёртывания | Не является источником жизнеспособных лимфоцитов и не заменяет клеточную фракцию |
| Пунктат или тканевой материал | Локальные клетки воспалительного инфильтрата | Может применяться в специальных локальных исследованиях, но не является стандартным материалом для системной РБТЛ |
| Специфический аллерген или лекарственный препарат | Антиген-индуцированная активация сенсибилизированных лимфоцитов | Позволяет оценить наличие клеточного ответа на предполагаемый причинный фактор |
| Митоген, например фитогемагглютинин | Неспецифическая способность лимфоцитов к пролиферации | Положительный контроль жизнеспособности и функциональной полноценности клеток |
| Индекс стимуляции и другие показатели пролиферации | Разница между ответом на антиген и контролем | Используются для лабораторной интерпретации с учётом референсных значений и клинических данных |
Качество исследования зависит от своевременной доставки образца, достаточной жизнеспособности клеток и корректно подобранной концентрации стимулятора. Системные глюкокортикостероиды и другие иммунодепрессанты могут уменьшать выраженность клеточного ответа. Результат необходимо сопоставлять с анамнезом, сроками реакции, данными кожных и серологических тестов. РБТЛ рассматривают как дополнительный метод, а не как самостоятельный критерий установления аллергического заболевания.