2) параллельно вне зависимости от полученного результата при культивировании непрогретой пробирки при 42 °С (+)
3) последовательно в зависимости от полученного результата при культивировании прогретой пробирки при 42 °С
4) последовательно в зависимости от полученного результата при культивировании непрогретой пробирки при 37 °С
При подозрении на газовую гангрену исследование прогретого и непрогретого материала проводят параллельно, не ожидая результата посева непрогретой пробы при 42 °C. Это связано с различием исследуемых форм возбудителя: прогрев уничтожает вегетативные клетки сопутствующей микрофлоры и большинства клостридий, но сохраняет устойчивые споры. Последующее культивирование прогретого материала позволяет выявить спорообразующие клостридии, тогда как непрогретый материал сохраняет вегетативные клетки, включая микроорганизмы, находящиеся в активной фазе роста и способные участвовать в смешанной инфекции.
Температура 42 °C используется как дополнительный селективно-дифференцирующий режим, ускоряющий выявление отдельных представителей клостридий, прежде всего Clostridium perfringens. Однако отрицательный результат в этой пробирке не исключает наличия возбудителя: он может присутствовать в виде спор, быть чувствительным к повышенной температуре или находиться в малом количестве. Поэтому прекращение исследования по результату одного посева создало бы риск ложноотрицательной диагностики; правильный принцип — параллельное продолжение работы с прогретой и непрогретой пробами.
| Исследуемый материал или режим | Что сохраняется или выявляется | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Прогрев перед посевом | Преимущественно устойчивые споры клостридий | Селективное обогащение спорообразующих анаэробов и снижение влияния вегетативной сопутствующей микрофлоры |
| Непрогретый материал, инкубация при 37 °C | Споры и вегетативные формы микроорганизмов | Выявление активно размножающихся клостридий и возможной смешанной инфекции |
| Непрогретый материал, инкубация при 42 °C | Термотолерантные и быстро растущие варианты клостридий | Дополнительный режим ускоренного или селективного выявления, но не самостоятельный критерий исключения инфекции |
| Рост в анаэробной среде | Помутнение, газообразование, изменение цвета или консистенции среды | Ориентировочный признак анаэробного роста; требует выделения чистой культуры |
| Clostridium perfringens | Быстрый рост, гемолиз, лецитиназная активность, характерная морфология | Наиболее частый возбудитель газовой гангрены; признаки подтверждают вид только в комплексе |
| Отрицательный результат одного режима | Возбудитель может сохраняться в другой физиологической форме или быть подавлен условиями культивирования | Не является основанием для прекращения параллельного исследования остальных посевов |
Окончательное заключение основывают на совокупности данных: анамнезе и клинических признаках быстро прогрессирующего отека, боли, некроза и газообразования, результатах анаэробного культивирования и идентификации культуры. Для подтверждения могут применяться биохимические тесты, масс-спектрометрия и молекулярные методы. Лабораторная диагностика не должна задерживать хирургическую обработку раны, интенсивную терапию и назначение антибактериальных препаратов при клиническом подозрении на клостридиальную инфекцию.