2) солянокислого спирта раствор 3% (+)
3) дистиллированная вода
4) метиловый спирт
Правильный ответ — 3% раствор солянокислого спирта. В классической окраске по Цилю—Нильсену он используется как дифференцирующий реагент для удаления карболового фуксина из клеток и элементов материала, не обладающих кислотоустойчивостью. Кислотоустойчивые микроорганизмы, прежде всего микобактерии, после обработки сохраняют красную окраску, тогда как фон и большинство других бактерий обесцвечиваются.
Механизм реакции связан с особенностями клеточной стенки микобактерий, содержащей большое количество липидов и миколовых кислот. После проникновения концентрированного карболового фуксина при прогревании краситель прочно удерживается в такой клеточной стенке и не удаляется кислотно-спиртовой смесью. Поэтому выявление тонких красных палочек на контрастном синем фоне рассматривается как микроскопический признак кислотоустойчивых бактерий.
Смесь Никифорова применяется преимущественно для фиксации мазка, метиловый спирт также может использоваться как фиксатор, а дистиллированная вода выполняет роль промывочной жидкости. Ни один из этих реагентов не обеспечивает избирательного обесцвечивания мазка. Концентрация и время воздействия солянокислого спирта имеют диагностическое значение: чрезмерная дифференциация может привести к потере окраски кислотоустойчивых форм, а недостаточная — к сохранению неспецифического красного фона.
| Этап окраски | Основной реагент | Назначение | Результат |
|---|---|---|---|
| Фиксация мазка | Метиловый спирт или другой фиксатор | Закрепление материала на стекле и сохранение морфологии клеток | Материал не смывается при последующей обработке |
| Первичная окраска | Карболовый фуксин Циля | Проникновение красителя в клеточную стенку при прогревании | Кислотоустойчивые и некислотоустойчивые структуры окрашиваются в красный цвет |
| Дифференциация | 3% солянокислый спирт | Удаление фуксина из некислотоустойчивых клеток и фоновых элементов | Кислотоустойчивые бактерии остаются красными |
| Контрастная окраска | Метиленовый синий или малахитовый зелёный | Окрашивание обесцвеченного фона | Красные микобактерии становятся заметными на синем или зелёном фоне |
| Кислотоустойчивые бактерии | Устойчивость к кислотно-спиртовой обработке | Дифференциальный диагностический признак | Красные палочки, иногда расположенные скоплениями или поодиночке |
| Некислотоустойчивые микроорганизмы и фон | После воздействия дифференциатора | Обесцвечивание с последующим контрастным окрашиванием | Синие или зелёные элементы, не имеющие устойчивой красной окраски |
Окраска по Цилю—Нильсену применяется прежде всего для обнаружения кислотоустойчивых микобактерий в клиническом материале, включая мокроту, бронхиальный секрет и другие образцы. Положительный результат подтверждает наличие кислотоустойчивых форм, но сам по себе не позволяет надёжно определить вид возбудителя или отличить комплекс Mycobacterium tuberculosis от нетуберкулёзных микобактерий. Для видовой идентификации и оценки лекарственной устойчивости используют культуральные, молекулярно-генетические и другие специализированные методы. Качество мазка, равномерность окраски и соблюдение режима дифференциации имеют принципиальное значение для достоверности исследования.