2) Грама
3) Циля – Нильсена
4) Романовского – Гимзы (+)
Риккетсии Провачека (Rickettsia prowazekii) — мелкие грамотрицательные облигатно внутриклеточные бактерии, возбудители эпидемического сыпного тифа. Для изучения их морфологии применяют окраску по Романовскому–Гимзе, при которой микроорганизмы приобретают сине-фиолетовую окраску и хорошо визуализируются в цитоплазме инфицированных клеток. Метод позволяет оценить характерные полиморфные формы риккетсий: короткие палочки, коккобациллы, а иногда нитевидные элементы.
Диагностическая ценность метода связана с особенностями строения и локализации возбудителя. Риккетсии имеют очень малые размеры, слабо воспринимают стандартную окраску по Граму и размножаются преимущественно в цитоплазме эндотелиальных клеток сосудов. Красители типа Романовского содержат азур и эозин, обеспечивающие контрастное окрашивание нуклеиновых кислот микроорганизма и клеточных структур, что облегчает выявление внутриклеточно расположенных бактерий.
| Метод окраски | Основное диагностическое назначение | Значение для выявления риккетсий |
|---|---|---|
| Романовского–Гимзы | Выявление внутриклеточных микроорганизмов, форменных элементов крови и клеточных структур | Позволяет визуализировать риккетсии как сине-фиолетовые коккобациллярные или палочковидные образования |
| По Граму | Разделение бактерий на грамположительные и грамотрицательные | Малоинформативен из-за малых размеров и слабого окрашивания риккетсий |
| По Нейссеру | Выявление зерен волютина у коринебактерий | Не предназначен для диагностики риккетсиозов |
| По Цилю–Нильсену | Обнаружение кислотоустойчивых микобактерий | Риккетсии не обладают кислотоустойчивостью |
| Серологические методы | Определение специфических антител к риккетсиям | Используются для подтверждения инфекции, но не для изучения морфологии |
| ПЦР | Выявление специфических фрагментов ДНК возбудителя | Обладает высокой специфичностью, однако не дает морфологической характеристики микроорганизма |
Микроскопическое обнаружение риккетсий требует материала с достаточным количеством инфицированных клеток и обычно выполняется в специализированной лаборатории. В рутинной диагностике эпидемического сыпного тифа основное значение имеют молекулярно-генетические и серологические методы, поскольку обычная световая микроскопия обладает ограниченной чувствительностью. Окраска по Романовскому–Гимзе сохраняет значение прежде всего как морфологический и учебно-диагностический метод. Работа с культурами R. prowazekii требует строгого соблюдения требований биологической безопасности.