2) среды с лактозой
3) простые питательные среды
4) среды с кровью (+)
Возбудитель дифтерии, Corynebacterium diphtheriae, относится к требовательным бактериям, поэтому для его выделения применяют обогащённые питательные среды. Наибольшее диагностическое значение имеют кровяные среды с теллуритом калия, например цистин-теллуритовый кровяной агар. Кровь обеспечивает дополнительные аминокислоты, витамины и другие ростовые факторы, повышающие вероятность получения культуры из материала ротоглотки или носоглотки.
Теллурит придаёт такой среде селективно-дифференциальные свойства: подавляет значительную часть сопутствующей микрофлоры и восстанавливается коринебактериями до металлического теллура. В результате подозрительные колонии приобретают серо-чёрную или чёрную окраску, что облегчает их обнаружение в смешанной культуре. Параллельный посев на обычный кровяной агар может повысить выделяемость штаммов, чувствительных к теллуриту.
Рост микроорганизма на кровяной или теллуритовой среде подтверждает наличие жизнеспособных коринебактерий, но сам по себе не доказывает токсигенность изолята. После видовой идентификации определяют наличие гена tox методом ПЦР и подтверждают фактическую продукцию дифтерийного токсина иммунопреципитационным тестом Элека. Именно способность штамма синтезировать токсин имеет решающее значение для подтверждения классической токсической дифтерии.
| Среда или метод | Назначение | Диагностический признак |
|---|---|---|
| Цистин-теллуритовый кровяной агар | Первичное селективное выделение C. diphtheriae | Серо-чёрные или чёрные колонии вследствие восстановления теллурита |
| Неселективный кровяной агар | Дополнительное культивирование, в том числе теллурит-чувствительных штаммов | Рост колоний без специфической индикации токсигенности |
| Свёрнутая сывороточная среда Лёффлера | Накопление культуры и выявление характерной морфологии | Плеоморфные булавовидные палочки с метахроматическими зёрнами |
| Простые питательные среды | Недостаточно эффективны для первичного выделения | Слабый рост или отсутствие диагностически полноценной культуры |
| Среды с лактозой | Используются преимущественно для дифференциации энтеробактерий | Ферментация лактозы не является основным критерием выделения возбудителя дифтерии |
| Культуры клеток | Не применяются для рутинного размножения бактерии | C. diphtheriae является внеклеточным микроорганизмом и растёт на искусственных средах |
| Тест Элека | Подтверждение продукции дифтерийного токсина | Линии иммунопреципитации между токсином и антитоксической сывороткой |
Материал для посева желательно получать до начала антибактериальной терапии, поскольку антибиотики снижают вероятность выделения жизнеспособного возбудителя. Исследуют мазки с границы поражённой и неизменённой слизистой, а также материал из носа; при кожной форме берут отделяемое из очага. Предварительное обнаружение грамположительных плеоморфных палочек поддерживает диагноз, но не заменяет культуральную идентификацию. Окончательное лабораторное заключение должно учитывать вид микроорганизма, наличие гена tox и доказанную продукцию токсина.