2) радиальной иммунодиффузии в геле по Манчини
3) двойной иммунодиффузии в геле по Оухтерлони
4) диффузии в агар (+)
Диффузия в агар — стандартный фенотипический метод определения чувствительности бактерий к антибактериальным препаратам, наиболее известный как диско-диффузионный метод Кирби—Бауэра. На поверхность агара Мюллера—Хинтона равномерно наносят стандартизированную бактериальную суспензию, после чего размещают диски с антибиотиками. В процессе инкубации препарат диффундирует в толщу среды и подавляет рост чувствительных микроорганизмов, формируя вокруг диска прозрачную зону задержки роста.
Оценивают диаметр зоны ингибиции в миллиметрах и сопоставляют его с пороговыми значениями, установленными актуальными стандартами EUCAST или CLSI. По результату штамм относят к категориям чувствительности: S — чувствительный при стандартном режиме дозирования, I — чувствительный при повышенной экспозиции либо промежуточный в зависимости от применяемой системы интерпретации, R — резистентный. Достоверность исследования зависит от чистоты культуры, правильной плотности инокулюма, состава и глубины питательной среды, срока и температуры инкубации.
Методы иммунодиффузии и иммунофлюоресценции предназначены преимущественно для выявления антигенов, антител или других иммунологических маркеров и не отражают прямое подавление роста бактерий антибиотиком. Для количественного определения минимальной подавляющей концентрации используют методы серийных разведений или градиентной диффузии; диско-диффузионный метод обычно дает стандартизированную категориальную оценку чувствительности.
| Подход | Принцип | Основной результат | Практическая характеристика |
|---|---|---|---|
| Диско-диффузионный метод | Диффузия антибиотика из диска в агар с подавлением роста чувствительных бактерий | Диаметр зоны задержки роста; категория S, I или R | Доступный стандартизируемый метод рутинной антибиотикограммы |
| Метод серийных разведений | Рост культуры оценивают в средах с последовательными концентрациями антибиотика | МИК — минимальная подавляющая концентрация | Позволяет получить количественный показатель, необходимый при сложных инфекциях и контроле терапии |
| Градиентная диффузия | Антибиотик распределен по градиенту концентраций на пластиковой полоске | МИК по пересечению эллипса подавления роста со шкалой полоски | Удобна для отдельных препаратов и микроорганизмов, но дороже дисков |
| Иммунофлюоресценция | Выявление антигена или антител с помощью флуоресцентно меченых реагентов | Наличие или локализация иммунологической мишени | Не предназначена для определения антибиотикочувствительности |
| Иммунодиффузия по Манчини | Радиальная диффузия антигена в геле, содержащем специфические антитела | Диаметр преципитата, связанный с концентрацией антигена | Метод иммунологического количественного анализа, а не антибиотикограммы |
| Двойная иммунодиффузия по Оухтерлони | Встречная диффузия антигена и антител с образованием линии преципитации | Иммунологическое родство или специфичность взаимодействия | Используется для идентификации антигенов и антител, но не для оценки роста бактерий |
| Ключевые условия диско-диффузионного теста | Стандартный инокулюм около 0,5 по Мак-Фарланду, агар Мюллера—Хинтона, регламентированные инкубация и измерение | Сопоставимый и воспроизводимый результат | Отклонение условий может привести к ложной классификации чувствительности |
Интерпретация результата должна учитывать вид микроорганизма, антибиотик, локализацию инфекции и действующие клинические пороговые значения. При подозрении на механизмы резистентности, например продукцию карбапенемаз или индуцируемую резистентность к клиндамицину, выполняют дополнительные подтверждающие тесты. Результаты антибиотикограммы необходимо сопоставлять с клиническими данными и фармакокинетикой препарата. Правильное применение стандартизированного диско-диффузионного метода помогает обоснованно выбрать антибактериальную терапию и ограничить необоснованное назначение антибиотиков.