2) оксидазный тест (+)
3) тест ферментации лактозы
4) посев на среду Эндо
Для подтверждения принадлежности выделенной культуры к семейству Enterobacteriaceae применяют оксидазный тест как дифференциальный признак. Представители этого семейства, как правило, не продуцируют цитохром-c-оксидазу, поэтому реакция считается отрицательной: окрашивания реактива в течение установленного времени не происходит. Положительная оксидазная реакция, напротив, характерна для многих других грамотрицательных бактерий, включая представителей родов Pseudomonas, Aeromonas и Vibrio, и позволяет исключить типичных энтеробактерий.
Знак + в данном варианте обозначает правильный ответ, а не положительный результат самой реакции. Тест выявляет наличие фермента дыхательной цепи, переносящего электроны на цитохром c; при его наличии появляется быстрое фиолетовое окрашивание реагента. Отрицательный оксидазный тест не является единственным доказательством принадлежности культуры к Enterobacteriaceae, поэтому его оценивают совместно с морфологией, окраской по Граму, способностью ферментировать глюкозу и результатами биохимической идентификации.
Индолообразование имеет преимущественно родовую или видовую диагностическую ценность, поскольку положительный результат характерен только для отдельных энтеробактерий. Ферментация лактозы также не является семейственным признаком: лактозоположительные и лактозоотрицательные виды встречаются среди энтеробактерий. Посев на среду Эндо используется главным образом для первичного выделения и ориентировочной дифференциации грамотрицательных бактерий по ферментации лактозы, но сам по себе не подтверждает принадлежность культуры к семейству.
| Признак или метод | Характеристика у Enterobacteriaceae | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Оксидазный тест | Отрицательный | Базовый дифференциальный признак для отделения энтеробактерий от многих оксидазоположительных грамотрицательных палочек |
| Окраска по Граму и морфология | Грамотрицательные палочки, обычно без спор | Подтверждает принадлежность к группе грамотрицательных факультативных анаэробов, но не позволяет окончательно идентифицировать семейство |
| Ферментация глюкозы | Обычно положительная, с образованием кислоты, иногда газа | Важный общий признак при последующей биохимической идентификации |
| Ферментация лактозы | Возможна или отсутствует в зависимости от рода и вида | Позволяет дифференцировать отдельные виды, но не служит универсальным признаком семейства |
| Индолообразование | Результат вариабелен | Используется преимущественно для видовой дифференциации, например при распознавании Escherichia coli |
| Среда Эндо | Рост возможен; лактозоположительные культуры дают характерные окрашенные колонии | Селективно-дифференциальный метод первичного выделения, а не окончательное подтверждение семейства |
| Окончательная идентификация | Комплекс биохимических тестов, автоматизированные системы или MALDI-TOF MS | Уточняет род и вид после предварительного скрининга |
Отрицательный оксидазный тест особенно информативен при исследовании колоний с селективно-дифференциальных сред. При интерпретации результата необходимо соблюдать время считывания и использовать свежую культуру, поскольку позднее окрашивание может быть неспецифичным. В практической лабораторной диагностике принадлежность к Enterobacteriaceae подтверждают сочетанием нескольких согласующихся признаков. Для окончательной видовой идентификации применяют стандартизированные биохимические панели или масс-спектрометрию MALDI-TOF.