2) реакцию агглютинации
3) пробу с бактериофагом (+)
4) реакцию нейтрализации
Проба с бактериофагом основана на специфическом лизисе клеток Yersinia pestis под действием диагностического чумного бактериофага. При контакте фага с чувствительной культурой происходит его адсорбция на бактериальной клетке, проникновение генетического материала и последующее разрушение клетки с образованием зоны просветления или стерильного участка на питательной среде. Выявление характерного фаголизиса позволяет ускоренно подтвердить принадлежность выделенного возбудителя к Y. pestis.
Метод особенно ценен после получения подозрительной культуры из клинического материала или объектов внешней среды: он технически прост, достаточно быстр и обладает высокой видовой специфичностью при использовании стандартизированного бактериофага. Морфологическое обнаружение биполярно окрашенных грамотрицательных коккобацилл при микроскопии не является достаточным для подтверждения чумы, поскольку сходные признаки могут встречаться у других представителей семейства Yersiniaceae. Серологические реакции, включая агглютинацию, преимущественно выявляют антитела или подтверждают идентификацию культуры и имеют меньшее значение на самых ранних сроках заболевания.
| Метод | Что выявляет | Диагностическое значение при чуме | Основное ограничение |
|---|---|---|---|
| Проба с диагностическим бактериофагом | Специфическую чувствительность культуры к фагу и наличие фаголизиса | Ускоренная видовая идентификация Yersinia pestis | Требует жизнеспособных бактерий и соблюдения противоэпидемического режима |
| Темнопольная микроскопия | Морфологические и некоторые тинкториальные признаки микроорганизмов | Ориентировочная оценка материала | Недостаточная специфичность; не заменяет выделение и идентификацию культуры |
| Реакция агглютинации | Взаимодействие антигенов бактерии со специфическими антителами | Подтверждение идентичности выделенной культуры или серологическая диагностика | Возможны низкие титры в начале болезни и перекрёстные реакции |
| Реакция нейтрализации | Блокирование биологического эффекта токсина или вируса антителами | Не относится к стандартной ускоренной идентификации Y. pestis | Не имеет основного диагностического субстрата для подтверждения чумы |
| Бактериологический метод | Рост культуры, её культуральные, биохимические и антигенные свойства | Референтное подтверждение диагноза и последующая идентификация | Требует времени, специализированной лаборатории и биобезопасности |
| ПЦР | Специфические фрагменты ДНК возбудителя, например гены вирулентности | Быстрое молекулярное подтверждение при наличии валидированной методики | Результат зависит от качества образца и не всегда свидетельствует о жизнеспособности бактерий |
Положительный фаголизис оценивают только в совокупности с данными клинического, эпидемиологического и лабораторного обследования. При подозрении на чуму любые манипуляции с материалом проводят в лабораториях, имеющих соответствующий уровень биологической защиты. Для окончательного заключения результаты ускоренного теста сопоставляют с культуральными, молекулярными и, при необходимости, серологическими исследованиями.