2) 3-7 дней; 37 (+)
3) 12-24 часов; 28
4) 8-12 часов; 42
Для выделения Bordetella pertussis используют специальные питательные среды — казеиново-угольный агар Ригана—Лоу или картофельно-глицериновый агар Борде—Жангу, поскольку возбудитель требователен к условиям культивирования и плохо растёт на обычных средах. Посевы инкубируют при температуре около 35–37 °C, оптимально — 37 °C, в течение 3–7 суток. Именно поэтому правильным является вариант, предусматривающий семидневный диапазон инкубации при 37 °C: более короткое наблюдение может привести к пропуску медленно формирующихся колоний.
B. pertussis — мелкая аэробная коккобацилла, относящаяся к требовательным и медленно растущим бактериям. На селективной среде колонии обычно становятся заметными через несколько суток и имеют небольшие размеры, гладкую поверхность и серовато-перламутровый оттенок; классическое описание — вид капли ртути . Для повышения диагностической ценности материал берут из носоглотки, предпочтительно до начала или в первые недели приступообразного кашля, когда бактериальная нагрузка максимальна.
Слишком низкая температура замедляет метаболизм и рост возбудителя, а чрезмерно высокая может снижать его жизнеспособность, поэтому экстремальные температурные режимы неприемлемы. Посев желательно выполнять непосредственно после взятия материала либо использовать транспортную систему, сохраняющую жизнеспособность бордетелл. Культуральное выделение обеспечивает подтверждение жизнеспособного возбудителя, однако при позднем обращении или после антибиотикотерапии его чувствительность ниже, чем у молекулярных методов.
| Метод или этап диагностики | Материал и условия | Срок получения результата | Диагностическое значение и ограничения |
|---|---|---|---|
| Культуральное исследование | Назофарингеальный аспират или мазок; селективный агар Ригана—Лоу либо Борде—Жангу; 35–37 °C | Обычно 3–7 суток | Подтверждает наличие жизнеспособной B. pertussis; чувствительность снижается при позднем взятии материала |
| Первичный рост B. pertussis | Мелкие гладкие серовато-перламутровые колонии, иногда с характерным видом капли ртути | Чаще через несколько суток | Требует видовой идентификации; морфология колоний не является единственным критерием |
| ПЦР | Назофарингеальный материал; выявление специфических участков ДНК возбудителя | От нескольких часов до 1 суток | Быстрее культуры и сохраняет высокую информативность при снижении жизнеспособности бактерий; возможны требования к подтверждению мишени |
| Серологическое исследование | Сыворотка крови; определение антител, в том числе к коклюшному токсину | Через 2–4 недели от начала заболевания и позднее | Полезно при поздней диагностике; ранний отрицательный результат не исключает инфекцию |
| Оптимальные сроки взятия материала | Катаральный период и первые 1–2 недели приступообразного кашля | До антибактериальной терапии или в самом её начале | В этот период вероятность выделения возбудителя максимальна |
| Идентификация выделенной культуры | Комплекс признаков, биохимические тесты, MALDI-TOF масс-спектрометрия или видоспецифическая ПЦР | После появления подозрительных колоний | Позволяет отличить B. pertussis от других бордетелл, включая B. parapertussis |
Отрицательный результат посева не исключает коклюш, особенно при позднем обследовании, предварительном приёме антибиотиков или неправильном взятии материала. При наличии типичной клинической картины целесообразно сочетать культуральное исследование с ПЦР, а на поздних сроках — с серологией. Транспортировка мазка из носоглотки на обычном ватном тампоне может снижать выживаемость бордетелл, поэтому предпочтительны дакроновые или флокированные зонды и специализированные транспортные среды. Культуральное подтверждение имеет особую ценность для эпидемиологического надзора и определения циркулирующих штаммов.