2) Граму
3) Романовскому – Гимзе (+)
4) Цилю – Нильсену
Для выявления капсулы Bacillus anthracis применяют окраску по Романовскому–Гимзе. Капсула этого микроорганизма имеет полипептидную природу и состоит преимущественно из поли-D-глутаминовой кислоты. При окрашивании капсульное вещество контрастно выделяется вокруг бактериальной клетки в виде розовато-лилового ореола, тогда как микробные тела приобретают более интенсивную фиолетово-синюю окраску.
Капсула является важным фактором вирулентности возбудителя сибирской язвы: она препятствует фагоцитозу и способствует выживанию бактерий в тканях и крови. Наиболее отчетливо капсула выявляется в клиническом материале и при культивировании в условиях, стимулирующих ее образование, включая наличие сыворотки, бикарбоната и повышенной концентрации углекислого газа. Обнаружение капсулированных крупных грамположительных палочек в сочетании с характерной морфологией имеет существенное диагностическое значение.
Окраска по Граму позволяет подтвердить грамположительную принадлежность и палочковидную форму бактерий, однако не является специальным методом демонстрации капсулы. Окраска по Нейссеру используется преимущественно для выявления метахроматических гранул коринебактерий, а метод Циля–Нильсена — для кислотоустойчивых микобактерий; для капсулы B. anthracis эти методы непригодны.
| Метод | Основной выявляемый признак | Диагностическое значение при подозрении на сибирскую язву |
|---|---|---|
| Романовского–Гимзе | Капсула в виде контрастного розовато-лилового ореола вокруг бактериальной клетки | Специальный метод визуализации капсулы B. anthracis в исследуемом материале |
| Грам | Крупные грамположительные палочки с квадратными концами, расположенные цепочками | Подтверждает морфологию и тинкториальные свойства, но не заменяет капсульную окраску |
| Нейссера | Метахроматические гранулы волютина, характерные прежде всего для коринебактерий | Для выявления капсулы сибиреязвенного микроба диагностически не используется |
| Циля–Нильсена | Кислотоустойчивые бактерии, сохраняющие карболовый фуксин после обесцвечивания кислотой | Применяется для микобактерий; B. anthracis кислотоустойчивостью не обладает |
| Негативная окраска тушью или по Бурри–Гинсу | Капсула выявляется как светлый неокрашенный ободок на темном фоне | Может использоваться для демонстрации капсулы, но в данном тесте стандартным ответом является метод Романовского–Гимзе |
| Культуральное исследование | Серо-белые шероховатые колонии, возможный головчатый или медузоподобный край; обычно отсутствие гемолиза | Дополняет микроскопию и требует подтверждения в специализированной лаборатории с соблюдением мер биологической безопасности |
Капсула B. anthracis относится к ключевым признакам патогенности и помогает отличать возбудитель от ряда сапрофитных бацилл. Ее образование усиливается в организме хозяина и при специальных условиях культивирования, поэтому отсутствие капсулы в обычной культуре не исключает инфекцию. Окончательная идентификация должна учитывать совокупность микроскопических, культуральных и молекулярно-биологических признаков. Работа с подозрительным материалом проводится только в лаборатории, имеющей соответствующий уровень биологической защиты.