2) ПЦР
3) реакцию термопреципитации по Асколи (+)
4) пробу Бюрне
Реакция термопреципитации по Асколи является классическим серологическим методом обнаружения термостабильного антигена Bacillus anthracis в исследуемом материале. Она особенно применима при исследовании шерсти, кожи, мехового и другого животного сырья, трупного материала, а также отдельных объектов внешней среды, когда выделение жизнеспособной культуры затруднено. В основе метода лежит устойчивость соматического антигена возбудителя к нагреванию: его можно экстрагировать из материала кипячением без утраты способности специфически взаимодействовать с антителами.
Полученный прозрачный термоэкстракт осторожно наслаивают на специфическую преципитирующую противосибиреязвенную сыворотку. При наличии соответствующего растворимого антигена на границе двух жидкостей образуется видимое беловатое кольцо преципитации вследствие формирования нерастворимых иммунных комплексов антиген–антитело . Световая микроскопия предназначена прежде всего для выявления морфологических признаков микроорганизма, а ПЦР обнаруживает специфические последовательности ДНК B. anthracis, то есть генетический материал, а не сам антиген. Проба Бюрне представляет собой кожно-аллергический тест с бруцеллином, применявшийся при диагностике бруцеллёза, и к индикации сибиреязвенного антигена отношения не имеет.
| Метод | Что выявляет | Диагностический принцип | Значение при сибирской язве |
|---|---|---|---|
| Термопреципитация по Асколи | Термостабильный антиген B. anthracis | Специфическая преципитация растворимого антигена антителами | Классический метод исследования животного сырья и контаминированных материалов |
| Световая микроскопия | Бактериальные клетки и их морфологические признаки | Визуализация окрашенного препарата | Позволяет заподозрить возбудителя, но не является методом непосредственного выявления растворимого антигена |
| ПЦР | Специфические фрагменты ДНК B. anthracis | Амплификация определённых генетических мишеней | Высокоспецифичная современная молекулярная идентификация возбудителя |
| Бактериологический посев | Жизнеспособный возбудитель | Выделение культуры на питательных средах с последующей идентификацией | Позволяет получить изолят, но требует соблюдения специальных требований биобезопасности |
| Кольцо преципитации | Комплекс антиген–антитело | Образование нерастворимого иммунного комплекса на границе фаз | Критерий положительной реакции Асколи |
| Проба Бюрне | Гиперчувствительность замедленного типа к бруцеллину | Кожно-аллергическая реакция | Связана с диагностикой бруцеллёза, а не сибирской язвы |
Ключевой особенностью реакции Асколи является возможность обнаружить антиген даже в материале, где микроорганизмы утратили жизнеспособность, поскольку диагностически значимый компонент сохраняет термостабильность. Поэтому метод исторически получил особое значение при санитарно-ветеринарном исследовании кожи, шерсти и другого сырья животного происхождения. В современной лабораторной практике для подтверждения и точной идентификации B. anthracis широко применяются культуральные и молекулярно-генетические методы. Однако при формулировке задания именно на выявление сибиреязвенного антигена классическим правильным ответом является реакция термопреципитации по Асколи.