2) Нейссеру (+)
3) Ожешко
4) Лёффлеру
Окраска по Нейссеру предназначена для выявления метахроматических гранул — внутриклеточных запасных включений, содержащих полифосфаты (волютин, или гранулы Бабеша—Эрнста). При взаимодействии с основными красителями полифосфатные структуры проявляют эффект метахромазии: гранулы окрашиваются в тёмно-синий или фиолетовый цвет, тогда как цитоплазма приобретает более светлую желтовато-коричневую окраску. Наиболее характерно обнаружение таких гранул у коринебактерий, особенно у Corynebacterium diphtheriae, где они обычно располагаются полярно.
Выявление гранул Нейссером является важным ориентировочным признаком при микроскопической диагностике дифтерии и других коринебактериозов. В мазке могут определяться булавовидные палочки, располагающиеся под углом друг к другу или в виде китайских иероглифов , с интенсивно окрашенными полярными включениями. Однако результат окраски не подтверждает токсигенность возбудителя самостоятельно: окончательная идентификация требует выделения культуры, видовой верификации и определения токсигенных свойств штамма.
| Метод окраски | Выявляемая структура | Основной микроскопический признак | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| По Нейссеру | Метахроматические гранулы волютина | Тёмно-синие или фиолетовые гранулы на фоне светлой цитоплазмы, часто у полюсов клетки | Ориентировочное распознавание коринебактерий, прежде всего C. diphtheriae |
| По Бурри—Гинсу | Капсула бактерий | Светлый неокрашенный ореол вокруг клетки на тёмном фоне | Выявление капсул у капсульных микроорганизмов; для волютиновых гранул не применяется |
| По Ожешко | Эндоспоры | Споры окрашиваются контрастно по отношению к вегетативной клетке и сохраняют краситель после обесцвечивания | Определение спорообразующих бактерий, главным образом представителей родов Bacillus и Clostridium |
| По Лёффлеру | Общая морфология бактериальных клеток | Интенсивно окрашенные синие клетки, хорошо различимые форма, размеры и расположение | Быстрая ориентировочная оценка морфологии; специфического выявления метахроматических гранул не обеспечивает |
| Метахромазия | Химически неоднородные внутриклеточные полифосфатные включения | Изменение оттенка основного красителя при связывании с полифосфатами | Физико-химическая основа диагностической информативности окраски по Нейссеру |
| Культуральное исследование | Жизнеспособный возбудитель и его колонии | Рост на селективных и дифференциальных средах с последующей идентификацией | Необходимо для подтверждения вида и проведения дальнейшего исследования токсигенности |
| Определение токсигенности | Способность штамма продуцировать дифтерийный токсин | Положительный тест на токсин или ген tox при применении валидированного метода | Ключевой критерий эпидемиологической и клинической значимости штамма |
Метахроматические гранулы отражают накопление фосфатных соединений и относятся к запасным включениям бактериальной клетки. Их количество и выраженность могут зависеть от возраста культуры и условий выращивания, поэтому отрицательный результат не исключает наличие коринебактерий. Окраска по Нейссеру особенно полезна как быстрый этап первичной микроскопической оценки материала. При подозрении на дифтерию микроскопические признаки всегда сопоставляют с клиническими данными и результатами бактериологического исследования.