2) связывания комплемента
3) пассивной гемагглютинации
4) пассивной латекс-агглютинации (+)
Экспресс-выявление энтеротоксина Clostridium perfringens в фекалиях выполняют методом пассивной, чаще обратной пассивной, латекс-агглютинации. Латексные частицы сенсибилизируют специфическими антителами к энтеротоксину; при наличии антигена в исследуемом экстракте он связывает антитела на разных частицах и образует видимые агрегаты. Результат оценивают по появлению хлопьевидной агглютинации по сравнению с отрицательным контролем.
Метод подходит для экспресс-анализа, поскольку не требует предварительного выделения и длительного культивирования возбудителя. Исследуется непосредственно токсин, а не только присутствие клеток C. perfringens, которые могут обнаруживаться в кишечнике и у лиц без заболевания. Поэтому положительный результат должен оцениваться совместно с клинической картиной острого пищевого токсикоинфекционного заболевания, данными эпидемиологического анамнеза и качеством забора материала.
Реакции связывания комплемента и пассивной гемагглютинации не являются оптимальными для быстрого прямого обнаружения энтеротоксина в кале: первая преимущественно применяется для выявления иммунологических реакций с участием комплемента, а вторая использует эритроциты и менее специфична для данной диагностической задачи. Агглютинация-лизис также не обеспечивает стандартного прямого выявления растворимого энтеротоксина. Таким образом, специфическое взаимодействие токсина с антителами, фиксированными на латексных частицах, обосновывает правильность выбранного метода.
| Метод | Основной объект обнаружения | Иммунологический принцип | Практическое значение при подозрении на энтеротоксин |
|---|---|---|---|
| Обратная пассивная латекс-агглютинация | Свободный энтеротоксин в фекальном экстракте | Антиген связывает антитела на латексных частицах и вызывает их склеивание | Быстрый специфичный скрининговый метод; результат виден визуально |
| Пассивная гемагглютинация | Обычно антитела или антиген при использовании сенсибилизированных эритроцитов | Агглютинация эритроцитов с образованием сеточки | Может применяться в отдельных иммунологических тестах, но не является предпочтительным экспресс-тестом для CPE в кале |
| Реакция связывания комплемента | Комплекс антиген–антитело с фиксацией комплемента | Потребление комплемента иммунным комплексом с последующей индикаторной реакцией | Не предназначена для простого прямого выявления энтеротоксина в фекалиях |
| Агглютинация-лизис | Преимущественно клеточные антигены и бактериальные структуры | Специфическое связывание антител с последующей агглютинацией и лизисом клеток | Не является стандартным методом определения растворимого энтеротоксина |
| Бактериологический метод | Живые штаммы C. perfringens | Анаэробное культивирование, идентификация и оценка токсигенности | Подтверждает наличие возбудителя, но требует времени и не заменяет прямое выявление токсина |
| ПЦР на ген cpe | Генетический маркер энтеротоксигенности | Амплификация специфического участка ДНК | Выявляет потенциальную способность штамма продуцировать токсин, но не доказывает наличие активного токсина в образце |
Положительная латекс-агглютинация свидетельствует о наличии энтеротоксина в концентрации не ниже аналитического порога набора. Отрицательный результат не исключает заболевание при позднем взятии материала, недостаточном содержании токсина или нарушении условий транспортировки. Для подтверждения сомнительных результатов используют контрольные реакции и, при необходимости, другой валидированный метод, например иммуноферментный анализ или ПЦР с исследованием изолированного штамма.