2) не учитывают
3) пересевают на скошенный питательный агар (+)
4) пересевают в бульон
При исследовании воды на общие колиформные бактерии (ОКБ) небольшую подозрительную колонию не отбрасывают, а пересевают на скошенный питательный агар. Такой перенос позволяет получить достаточную биомассу изолята и сохранить его в виде чистой культуры для последующей идентификации. Размер колонии сам по себе не определяет ее диагностическую ценность: мелкий рост может быть связан с низкой концентрацией микроорганизмов, ранним сроком инкубации или повреждением клеток.
На плотной среде при посеве из отдельной колонии легче контролировать чистоту культуры, морфологию роста и отсутствие примеси. После накопления биомассы проводят микроскопию с окраской по Граму и подтверждающие биохимические исследования, предусмотренные методикой определения ОКБ. Непосредственная окраска маленькой колонии может дать недостаточное количество материала и не заменяет выделение чистой культуры.
Пересев в жидкий бульон не является оптимальным первичным приемом: в нем невозможно надежно оценить изолированность культуры, а при наличии даже минимальной примеси она может быстро размножиться. Поэтому стандартный принцип бактериологической диагностики — сначала получить достаточный рост на плотной среде, затем подтвердить принадлежность выделенного изолята к ОКБ.
| Ситуация или метод | Основная цель | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Мелкая подозрительная колония | Перенос на скошенный питательный агар | Накопление биомассы и получение жизнеспособной чистой культуры |
| Хорошо изолированная колония достаточного размера | Непосредственная подготовка материала к исследованию | Возможны микроскопия, окраска по Граму и биохимическая идентификация |
| Окраска по Граму из малой колонии | Предварительная оценка формы и тинкториальных свойств | Может быть технически недостаточной из-за малого количества клеток; не заменяет пересев |
| Пересев в жидкий бульон | Обогащение и размножение микроорганизмов | Не обеспечивает визуального контроля чистоты и может усилить рост посторонней микрофлоры |
| Игнорирование мелкой колонии | Исключение объекта из анализа | Недопустимо: возможно снижение концентрации или замедленный рост ОКБ |
| Рост на скошенном агаре | Получение достаточного количества культуры для дальнейших тестов | Создает условия для оценки морфологии, чистоты и биохимических свойств изолята |
| Подтверждение ОКБ | Комплексная идентификация выделенной культуры | Учитывают морфологию, окраску по Граму и результаты регламентированных биохимических реакций |
Размер колонии не является самостоятельным критерием ее исключения из исследования. Решающее значение имеет возможность получить из нее чистую культуру и подтвердить видовую или групповую принадлежность. Работа на плотной среде снижает риск потери диагностически значимого изолята и облегчает контроль контаминации. Окончательный результат выдают только после выполнения всех тестов, предусмотренных нормативной методикой.