2) комплемент (+)
3) гемолитическая сыворотка
4) антиген
В реакции связывания комплемента лимитирующим компонентом является комплемент. Его вносят в строго стандартизированном, ограниченном количестве, предварительно определяя гемолитическую активность. Поэтому результат реакции зависит от того, будет ли этот объем комплемента связан иммунным комплексом антиген–антитело или останется свободным. Избыток комплемента исказил бы результаты и мог бы приводить к неспецифическому гемолизу.
Реакция проводится в две стадии. Сначала комплемент взаимодействует с исследуемой сывороткой и специфическим антигеном; при наличии соответствующих антител образуется иммунный комплекс, фиксирующий и потребляющий комплемент. Затем добавляют эритроциты барана, сенсибилизированные гемолитической сывороткой, содержащей антитела-амиboцепторы. Если комплемент был связан на первой стадии, гемолиз отсутствует — это положительный результат; если антитела отсутствуют, свободный комплемент вызывает гемолиз эритроцитов.
Таким образом, гемолитическая сыворотка и эритроциты образуют индикаторную систему, антиген обеспечивает специфичность, а исследуемая сыворотка является источником возможных антител. Ключевым контролируемым параметром остается количество и активность комплемента, поскольку именно его связывание переводит иммунологическую реакцию в регистрируемый визуальный признак — отсутствие гемолиза.
| Компонент или контроль | Основная функция | Интерпретация взаимодействия |
|---|---|---|
| Комплемент | Эффекторный фактор реакции, вносимый в ограниченном стандартизированном количестве | Связывается иммунным комплексом или остается свободным; определяет конечный результат |
| Специфический антиген | Реагирует с соответствующими антителами исследуемой сыворотки | При наличии антител формирует комплекс, фиксирующий комплемент |
| Исследуемая сыворотка | Содержит либо не содержит специфические антитела, способные связывать комплемент | Положительная реакция приводит к потреблению комплемента и отсутствию гемолиза |
| Гемолитическая сыворотка | Содержит антитела к эритроцитам барана и сенсибилизирует их | Позволяет выявить свободный комплемент на индикаторной стадии |
| Эритроциты барана | Индикатор повреждающего действия комплекса антитело–комплемент | Гемолиз означает, что комплемент не был связан в первой стадии |
| Положительный контроль | Содержит известные антитела и соответствующий антиген | Должен демонстрировать отсутствие гемолиза и подтверждать работоспособность системы |
| Контроль комплемента | Проверяет активность и отсутствие самопроизвольного гемолиза | Подтверждает, что используемая доза комплемента вызывает гемолиз сенсибилизированных эритроцитов |
Активность комплемента нестабильна и снижается при неправильном хранении, поэтому его титруют перед постановкой реакции. Для достоверной оценки необходимы контроли исследуемой сыворотки, антигена и гемолитической системы, поскольку возможны неспецифическое связывание комплемента и собственная антикомплементарная активность образца. Диагностически значимым является не сам гемолиз, а его отсутствие в условиях сохранной работы контрольных систем.