2) спор
3) жгутиков
4) капсул
Окраска по Нейссеру предназначена для выявления метахроматических гранул волютина — полифосфатных включений бактериальной клетки, также называемых гранулами Бабеша–Эрнста. Они особенно характерны для коринебактерий, включая Corynebacterium diphtheriae, и чаще располагаются на полюсах клетки. Благодаря метахромазии полифосфатные гранулы окрашиваются в тёмно-сине-фиолетовый цвет, тогда как цитоплазма приобретает более светлую желтовато-коричневую окраску.
Выявление гранул волютина имеет значение как ориентировочный признак при микроскопической диагностике дифтерийных коринебактерий в сочетании с характерной булавовидной формой клеток и расположением в виде китайских иероглифов . Однако результат окраски по Нейссеру не является абсолютно специфичным и не заменяет выделение культуры, биохимическую идентификацию и определение токсигенности штамма. Метод не предназначен для обнаружения спор, жгутиков или капсул, поскольку эти структуры требуют иных способов окрашивания и микроскопии.
| Исследуемая структура | Метод выявления | Микроскопический признак | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Гранулы волютина | Окраска по Нейссеру | Тёмно-сине-фиолетовые метахроматические включения, часто в полярных отделах клетки | Ориентировочный признак коринебактерий, в том числе C. diphtheriae |
| Гранулы волютина | Окраска по Альберту | Тёмные гранулы на фоне зеленоватой цитоплазмы | Альтернативный способ подтверждения метахроматических включений |
| Эндоспоры | Окраска по Шефферу–Фултону | Споры окрашиваются в зелёный цвет, вегетативные клетки — в красный | Идентификация спорообразующих бактерий и оценка положения спор |
| Капсула | Негативная окраска тушью или метод Энтони | Светлый ореол вокруг окрашенной бактериальной клетки | Обнаружение капсульного материала и оценка капсульного типа |
| Жгутики | Специальная окраска с утолщением жгутиковых нитей | Тонкие нити, отходящие от поверхности клетки | Определение наличия и характера расположения жгутиков |
| Морфология коринебактерий | Окраска по Граму | Грамположительные булавовидные палочки, часто расположенные под углом друг к другу | Первичная ориентировочная характеристика культуры; не заменяет выявление волютина |
Метахромазия обусловлена особенностями взаимодействия красителя с полифосфатами, из-за чего цвет гранул отличается от цвета окружающей цитоплазмы. Наиболее информативно исследование молодых культур, поскольку выраженность волютиновых включений зависит от условий роста и фазы развития бактерий. Окончательное заключение о возбудителе дифтерии делают только с учётом культуральных свойств и способности штамма продуцировать дифтерийный токсин.