2) двойная зона гемолиза вследствие действия альфа- и бета-токсинов
3) почернение среды и появление множественных разрывов агара
4) позеленение колоний по мере пребывания на воздухе
Отмеченный признак представляет собой классическую бурную ферментацию молока, характерную для Clostridium perfringens. При инкубации в анаэробных условиях микроорганизм интенсивно ферментирует лактозу с образованием органических кислот и газа, преимущественно водорода и углекислого газа. Снижение pH вызывает красное окрашивание лакмуса, а газ разрывает и пронизывает образующийся казеиновый сгусток, придавая ему губкообразный вид; после отделения казеина остается прозрачная сыворотка.
Быстрое развитие реакции в течение нескольких часов при повышенной температуре связано с высокой сахаролитической активностью C. perfringens. Это важный дифференциально-диагностический признак при исследовании анаэробных культур, однако окончательная идентификация не должна основываться только на лакмусовом молоке: учитывают морфологию, анаэробный рост, гемолиз, лецитиназную активность и другие биохимические свойства.
Двойная зона гемолиза оценивается на кровяном агаре, а не в молочной среде; в современной токсинологической номенклатуре ее связывают главным образом с действием α-токсина и θ-токсина, или перфринголизина O. Почернение среды с разрывами агара характерно для газообразования и восстановления сульфитов на специальных селективных средах, например среде Вильсона—Блера, поэтому эти признаки не описывают реакцию лакмусового молока.
| Исследование | Наблюдаемый результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Лакмусовое молоко по Минкевичу | Бурная ферментация с быстрым изменением структуры молока | Признак выраженной сахаролитической активности и газообразования |
| Кислотность среды | Закисление и кирпично-красное окрашивание лакмуса | Результат накопления органических кислот при ферментации лактозы |
| Казеиновый сгусток | Творожистый, губкообразный, пронизанный пузырьками газа | Газ механически разрушает и разрыхляет сгусток казеина |
| Сыворотка | Прозрачная, отделившаяся от сгустка | Поддерживает интерпретацию типичной реакции без выраженного помутнения протеолитического происхождения |
| Кровяной агар | Двойная зона гемолиза | Дополнительный признак; наружная зона преимущественно связана с α-токсином, внутренняя — с θ-токсином |
| Среда Вильсона—Блера | Почернение колоний или среды, трещины и разрывы агара | Связано с восстановлением сульфитов и интенсивным образованием газа, а не с реакцией молока |
| Подтверждение вида | Сочетание анаэробного роста, морфологии, гемолиза, лецитиназы и биохимических реакций | Позволяет отличить C. perfringens от других клостридий и снизить риск ошибочной идентификации |
Таким образом, губкообразный кирпично-красный сгусток с пузырьками газа и прозрачной сывороткой является специфическим проявлением бурной ферментации лакмусового молока. Реакция особенно информативна при соблюдении анаэробных условий и правильного температурного режима. В практической бактериологии ее используют как быстрый ориентировочный тест, а видовую принадлежность подтверждают совокупностью культуральных, биохимических и токсигенных признаков.