2) идентификацию чистой культуры (+)
3) фаготипирование
4) определение чувствительности к антибиотикам
На третьем этапе бактериологического исследования Yersinia enterocolitica проводят идентификацию полученной чистой культуры. К этому моменту из исследуемого материала уже выделены изолированные колонии и исключена смешанная микрофлора; задача лаборатории — доказать их принадлежность к виду Y. enterocolitica с использованием совокупности культуральных, морфологических, биохимических и, при необходимости, масс-спектрометрических или молекулярно-генетических методов.
Идентификация включает оценку типичных свойств иерсиний: грамотрицательные короткие палочки, отсутствие спор и капсул, оксидазонегативность, обычно уреазоположительная реакция, способность к росту на селективных средах. Важным дифференциальным признаком является температурный диморфизм: большинство штаммов подвижны при 22–25 °C и неподвижны при 35–37 °C. Биохимический профиль, MALDI-TOF MS, видоспецифическая ПЦР или серологическая агглютинация позволяют подтвердить вид и отличить его от Y. pseudotuberculosis и других представителей семейства Enterobacterales.
Накопление чистой культуры относится к предшествующему этапу и необходимо для получения достаточного количества однородного материала. Определение чувствительности к антибиотикам выполняют после видовой идентификации, если это требуется для выбора терапии, а фаготипирование имеет преимущественно эпидемиологическое значение и не является основным методом видового распознавания. Поэтому правильным является вариант, предусматривающий идентификацию чистой культуры.
| Этап исследования | Основная задача | Типичные методы или признаки | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Первичный посев | Выделение возбудителя из клинического материала | Посев на селективные и дифференциально-диагностические среды | Получение подозрительных колоний при подавлении сопутствующей микрофлоры |
| Накопление и получение чистой культуры | Размножение изолята и устранение примеси других микроорганизмов | Пересева подозрительной колонии на неселективную питательную среду | Формирование однородной культуры для последующих исследований |
| Идентификация чистой культуры | Установление видовой принадлежности изолята | Морфология, окраска по Граму, оксидазная и уреазная реакции, биохимический профиль | Подтверждение Y. enterocolitica и дифференциация от близких видов |
| Подтверждающие методы | Уточнение видовой или эпидемиологической принадлежности | MALDI-TOF MS, ПЦР с видоспецифическими мишенями, серологическая агглютинация | Повышение точности идентификации, особенно при атипичных культуральных свойствах |
| Определение чувствительности | Оценка восприимчивости выделенного штамма к антибактериальным препаратам | Диско-диффузионный метод, градиентные тесты или определение МПК | Обоснование этиотропной терапии; выполняется после идентификации |
| Фаготипирование и генотипирование | Сравнение штаммов при эпидемиологическом расследовании | Фаготипирование, MLST, полногеномное секвенирование | Установление источника и связей между изолятами, но не первичная видовая идентификация |
Идентификация чистой культуры является центральным этапом подтверждения бактериологического диагноза и должна основываться не на одном признаке, а на их совокупности. Особое значение имеет сочетание морфологии, биохимических реакций и температурных особенностей роста. Современные автоматизированные и молекулярные методы сокращают сроки подтверждения, однако требуют предварительного получения чистого изолята. Результаты идентификации служат основанием для последующего определения антибиотикочувствительности и эпидемиологического типирования.