2) определение чувствительности к антибиотикам
3) идентификацию чистой культуры по антигенным свойствам
4) накопление чистой культуры (+)
Второй этап бактериологического исследования направлен на получение достаточного количества изолированной культуры сальмонелл для последующей идентификации. После первичного посева материала на среды обогащения и селективно-дифференциальные среды отбирают колонии, подозрительные по морфологии, и пересевают их на плотные питательные среды или скошенный агар. Повторное выделение изолированных колоний позволяет устранить примесь сопутствующей микрофлоры и накопить биомассу одного микроорганизма, то есть сформировать чистую культуру.
Идентификация по антигенным свойствам проводится позднее, когда чистота культуры подтверждена и имеется достаточное количество материала: используют реакции агглютинации с диагностическими О- и Н-сыворотками для определения серогруппы и серовара. Определение чувствительности к антибиотикам также выполняют на чистой культуре, обычно диско-диффузионным методом или методом определения минимальной подавляющей концентрации. Поэтому на данном этапе принципиально важны не окончательная серологическая характеристика и не антибиотикограмма, а выделение и накопление чистого изолята.
| Этап исследования | Основной метод | Диагностическая задача | Ожидаемый результат |
|---|---|---|---|
| Первичный посев | Посев материала в среды обогащения и на селективно-дифференциальные среды | Повысить вероятность обнаружения сальмонелл и ограничить рост сопутствующей микрофлоры | Рост обогащённой культуры и подозрительных колоний |
| Накопление чистой культуры | Пересев подозрительных колоний на плотные питательные среды, получение изолированных колоний | Очистить культуру от примесей и накопить достаточную биомассу | Изолят одного вида, пригодный для дальнейших исследований |
| Биохимическая идентификация | Изучение ферментативных свойств на дифференциальных средах и в тест-системах | Подтвердить принадлежность изолята к роду Salmonella | Характерный профиль: обычно отсутствие ферментации лактозы, утилизация глюкозы, нередко образование сероводорода; уреаза отрицательная |
| Серологическая идентификация | Реакция агглютинации с О- и Н-сыворотками | Определить серогруппу и серовар сальмонеллы | Специфическая агглютинация с соответствующей диагностической сывороткой |
| Определение чувствительности | Диско-диффузионный метод или определение минимальной подавляющей концентрации | Оценить фенотип устойчивости и выбрать рациональную антибактериальную терапию | Категория чувствительности: чувствительный, чувствительный при увеличенной экспозиции или устойчивый |
| Формулировка результата | Оценка культуральных, биохимических и серологических признаков в совокупности | Подтвердить этиологическую роль выделенного микроорганизма | Лабораторное заключение о выделении конкретного серовара Salmonella |
Чистота культуры является обязательным условием достоверной серологической и биохимической идентификации, поскольку смешанный рост может давать неспецифические или противоречивые результаты. Морфология колоний сама по себе не подтверждает сальмонеллёз и требует последующей верификации. Выделенный изолят при необходимости сохраняют для эпидемиологического типирования, сравнения штаммов и контроля устойчивости к антибиотикам.