2) автоклавирование (+)
3) кипячение
4) сухожаровой
Автоклавирование является основным и наиболее распространённым способом стерилизации питательных сред, поскольку большинство из них представляет собой водные растворы, устойчивые к воздействию влажного тепла. Стерилизация проводится насыщенным водяным паром под избыточным давлением; стандартный режим часто включает температуру около 121 °C в течение 15–20 минут, однако параметры уточняют с учётом объёма, состава среды и загрузки автоклава.
Механизм действия основан на конденсации пара на более холодной поверхности и передаче большого количества тепла, что вызывает денатурацию и коагуляцию белков микроорганизмов. Такой режим обеспечивает гибель вегетативных форм бактерий, грибов и большинства вирусов, а также устойчивых бактериальных спор при соблюдении необходимой экспозиции. Эффективность стерилизации зависит от свободного проникновения пара, поэтому ёмкости не заполняют полностью и не герметично закрывают.
Альтернативные методы применяют при наличии ограничений. Фильтрация подходит для термолабильных компонентов, например антибиотиков, сыворотки и некоторых витаминов, но не устраняет растворённые пирогены и требует стерильной техники. Кипячение не гарантирует уничтожение спор, а сухой жар хуже проникает в жидкие среды и может приводить к их перегреву, изменению состава и разрушению отдельных компонентов.
| Метод | Основной механизм | Типичное применение | Ограничения |
|---|---|---|---|
| Автоклавирование | Влажное тепло и конденсация насыщенного пара под давлением; денатурация белков | Большинство водных питательных сред, растворов и лабораторных материалов | Непригодно для термолабильных веществ; возможны гидролиз и изменение pH |
| Мембранная фильтрация | Механическое удаление микроорганизмов через фильтр с заданным размером пор | Растворы антибиотиков, сыворотки, витаминов и других термолабильных компонентов | Не уничтожает микроорганизмы, задержанные на фильтре; требуется асептическое разливание |
| Кипячение | Воздействие влажного тепла при температуре около 100 °C | Снижение микробной обсеменённости воды и некоторых объектов | Не обеспечивает надёжной стерилизации из-за сохранения бактериальных спор |
| Сухожаровая стерилизация | Окислительное повреждение и обезвоживание клеточных структур сухим горячим воздухом | Стеклянная посуда, металлические инструменты, термостойкие порошки и масла | Медленное и неравномерное прогревание жидких сред; риск разрушения компонентов |
| Дробная стерилизация | Повторное нагревание с интервалами для уничтожения проросших спор | Отдельные среды, чувствительные к температуре автоклавирования | Более трудоёмка и менее универсальна; требует строгого соблюдения режима |
Перед использованием автоклавирование должно быть валидировано с учётом фактической загрузки и объёма стерилизуемой среды. Контроль проводят физическими параметрами цикла, химическими индикаторами и, при необходимости, биологическими индикаторами на основе спор Geobacillus stearothermophilus. После стерилизации среду охлаждают и асептически разливают, поскольку повторное загрязнение может произойти уже после завершения цикла.