2) желатина
3) мясо-пептонный бульон (+)
4) мясо-пептонный агар
Основой среды для определения восстановления нитратов служит мясо-пептонный бульон, в который дополнительно вносят нитрат, обычно нитрат калия. Мясо-пептонный бульон содержит пептоны, аминокислоты, минеральные соли и другие факторы, обеспечивающие рост широкого спектра неспорообразующих и спорообразующих бактерий. Жидкая консистенция среды обеспечивает равномерный контакт микроорганизмов с нитратом и позволяет выявлять не только образование нитритов, но и газообразных продуктов денитрификации.
При наличии нитратредуктазы бактерии восстанавливают нитраты до нитритов. После инкубации результат выявляют реакцией Грисса: появление розово-красного окрашивания свидетельствует об образовании нитритов и расценивается как положительная реакция. Если окрашивание отсутствует, добавляют цинковую пыль: красный цвет после её внесения означает, что нитрат сохранился и реакция отрицательна; отсутствие окраски может указывать на дальнейшее восстановление нитрита до молекулярного азота или других конечных продуктов.
Казеин и желатина являются преимущественно белковыми субстратами для оценки протеолитической активности, а не универсальными основами нитратного теста. Мясо-пептонный агар также поддерживает рост бактерий, однако плотная среда менее удобна для равномерного проведения восстановительных реакций и регистрации газа. Поэтому стандартным выбором для постановки реакции восстановления нитратов является жидкий мясо-пептонный бульон с добавлением нитрата.
| Компонент или результат | Диагностическое значение |
|---|---|
| Мясо-пептонный бульон | Питательная жидкая основа, обеспечивающая рост исследуемой культуры и доступность нитрата для ферментативного восстановления. |
| Добавленный нитрат | Субстрат для нитратредуктазы; без него специфическая реакция восстановления нитратов не оценивается. |
| Розово-красное окрашивание после реактива Грисса | Образование нитрита; прямой положительный признак восстановления нитрата до нитрита. |
| Отсутствие окрашивания после реактива Грисса | Не позволяет сразу считать реакцию отрицательной, поскольку нитрат мог быть восстановлен далее, минуя накопление нитрита. |
| Красное окрашивание после добавления цинка | Нитрат сохранился в среде; реакция на восстановление нитратов отрицательная. |
| Отсутствие окрашивания после добавления цинка | Указывает на восстановление нитрата с последующим расходованием нитрита; результат следует учитывать совместно с контролями и признаками газообразования. |
| Газ в газоуловительной трубке | Признак денитрификации — восстановления нитрата или нитрита до газообразных соединений азота, включая молекулярный азот. |
Интерпретация реакции должна проводиться с обязательным учетом контрольных этапов и времени инкубации. Восстановление нитратов является важным биохимическим признаком при идентификации энтеробактерий, псевдомонад, стафилококков и других групп микроорганизмов. Результат используют в совокупности с морфологическими, культуральными и другими биохимическими свойствами изолята.