2) фиолетовый
3) зелёный
4) розовый (+)
Грамотрицательные бактерии при окраске по Граму приобретают розовую или красную окраску вследствие особенностей строения клеточной стенки. Их пептидогликановый слой тонкий, а снаружи расположена наружная мембрана, содержащая липополисахарид. После обработки спиртом или ацетоном комплекс кристаллического фиолетового с йодом не удерживается в клеточной стенке и вымывается, поэтому бактерии становятся бесцветными.
На завершающем этапе используется контрастный краситель — обычно сафранин или фуксин. Он окрашивает деколорированные клетки в розово-красный цвет, что и определяет результат микроскопии. В отличие от них грамположительные бактерии сохраняют фиолетовую окраску благодаря толстому многослойному пептидогликановому слою, который удерживает комплекс основного красителя.
| Этап или признак | Грамотрицательные бактерии | Грамположительные бактерии | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Основной краситель | Кристаллический фиолетовый первоначально окрашивает клетки в фиолетовый цвет | Кристаллический фиолетовый также первоначально окрашивает клетки в фиолетовый цвет | На этом этапе различия между группами ещё нет |
| Обработка раствором Люголя | Формируется комплекс кристаллический фиолетовый — йод | Формируется тот же окрашенный комплекс | Комплекс фиксирует основной краситель внутри клеточной стенки |
| Обесцвечивание спиртом или ацетоном | Комплекс вымывается через тонкий пептидогликановый слой и изменённую липидную наружную мембрану | Комплекс удерживается толстым пептидогликановым слоем | Это ключевой этап дифференциации по Граму |
| Контрастное окрашивание | Сафранин или фуксин окрашивает клетки в розовый или красный цвет | Контрастный краситель обычно не изменяет преобладающую фиолетовую окраску | Позволяет визуализировать деколорированные грамотрицательные клетки |
| Строение клеточной оболочки | Тонкий пептидогликан и наружная мембрана с липополисахаридом | Толстый пептидогликан, наружная мембрана отсутствует | Объясняет различие в устойчивости окраски |
| Примеры возбудителей | Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Neisseria meningitidis | Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Bacillus anthracis | Результат окраски помогает ориентировочно определить группу возбудителя и выбрать дальнейшие методы идентификации |
Результат окраски по Граму оценивают с учётом морфологии клеток, их расположения и качества приготовления мазка. На окраску могут влиять возраст культуры, чрезмерное обесцвечивание, недостаточная фиксация и повреждение клеточной стенки. Поэтому метод является важным ориентировочным этапом бактериологической диагностики, но не заменяет видовую идентификацию и определение чувствительности к антибиотикам. Розовая окраска после контрастного окрашивания соответствует грамотрицательной организации клеточной оболочки.