2) зелёный
3) коричневый
4) розовый
Грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, поскольку после обработки кристаллическим фиолетовым и раствором Люголя в клеточной стенке формируется устойчивый комплекс кристаллический фиолетовый — йод . При последующей обработке спиртом или ацетоном этот комплекс удерживается толстым многослойным слоем пептидогликана. Дополнительную роль играют тейхоевые и липотейхоевые кислоты, стабилизирующие структуру клеточной стенки.
У грамотрицательных бактерий слой пептидогликана значительно тоньше, а снаружи располагается внешняя мембрана, содержащая липополисахарид. Деколоризация разрушает внешнюю мембрану и удаляет первичный краситель, поэтому после нанесения контрастного красителя такие клетки приобретают розовую или красную окраску. Фиолетовая окраска в мазке является важным ориентировочным диагностическим признаком и оценивается вместе с формой клеток, их расположением и наличием спор.
К грамположительным относятся, в частности, стафилококки, стрептококки, энтерококки, коринебактерии, листерии и многие клостридии. Результат окраски необходимо интерпретировать с учётом возраста культуры и условий подготовки препарата: старые или повреждённые клетки могут окрашиваться грамвариабельно. Бактерии без клеточной стенки, например микоплазмы, методом Грама надёжно не выявляются, а микобактерии требуют применения кислотоустойчивых методов окраски.
| Признак | Грамположительные бактерии | Грамотрицательные бактерии | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| Основной компонент клеточной стенки | Толстый многослойный пептидогликан | Тонкий слой пептидогликана и внешняя мембрана | Определяет способность удерживать первичный краситель |
| Комплекс первичного красителя | Удерживается внутри клеточной стенки | Удаляется при деколоризации | Формирует различие между двумя группами |
| Окраска после завершения метода | Фиолетовая или сине-фиолетовая | Розовая или красная | Позволяет провести первичную дифференциацию бактерий в мазке |
| Типичные представители | Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Corynebacterium | Escherichia, Klebsiella, Pseudomonas, Neisseria | Сужает круг предполагаемых возбудителей инфекции |
| Дополнительные структуры | Тейхоевые и липотейхоевые кислоты; у некоторых видов — споры | Внешняя мембрана с липополисахаридом и периплазматическое пространство | Влияет на антигенные свойства, вирулентность и чувствительность к препаратам |
| Ограничения метода | Старые культуры могут становиться грамвариабельными | Повреждённые клетки иногда окрашиваются неоднородно | Окончательная идентификация требует посева, биохимических или молекулярных тестов |
Окраска по Граму относится к базовым методам первичной бактериоскопической диагностики. Она позволяет быстро оценить морфологию и предположить этиологическую группу возбудителя ещё до получения результатов культуры. Полученные данные используются для выбора направления дальнейшего исследования и ориентировочной эмпирической терапии, но не заменяют видовую идентификацию и определение антибиотикочувствительности. Правильность результата зависит от качества мазка, соблюдения времени деколоризации и использования свежей культуры.