2) определения каталазы и оксидазы
3) выявления продукции индола и сероводорода
4) постановки реакции Фогеса-Проскауэра и реакции с метил-рот (+)
Среда Кларка представляет собой глюкозофосфатный бульон, предназначенный для изучения конечных продуктов ферментации глюкозы. После инкубации одну часть культуры используют для реакции с метиловым красным, а другую — для реакции Фогеса–Проскауэра. Эти тесты входят в комплекс IMViC и применяются преимущественно для дифференциации представителей семейства Enterobacterales.
Реакция с метиловым красным выявляет смешаннокислое брожение, при котором образуется значительное количество стойких органических кислот и pH среды снижается ниже 4,4. В этом случае индикатор приобретает красную окраску. Реакция Фогеса–Проскауэра обнаруживает ацетоин — промежуточный продукт 2,3-бутандиолового пути ферментации; после добавления α-нафтола и щёлочи появляется розово-красное окрашивание.
Обе реакции обычно имеют противоположные результаты: микроорганизмы с выраженным смешаннокислым брожением, например Escherichia coli, дают положительную реакцию с метиловым красным и отрицательную реакцию Фогеса–Проскауэра. Для Klebsiella и Enterobacter, напротив, характерны отрицательная метил-рот реакция и положительный тест Фогеса–Проскауэра.
| Диагностический тест | Определяемый признак | Положительный результат | Типичный пример |
|---|---|---|---|
| Метил-рот | Смешаннокислая ферментация глюкозы | Стойкая красная окраска | Escherichia coli |
| Фогеса–Проскауэра | Образование ацетоина | Розово-красная окраска | Klebsiella pneumoniae, Enterobacter spp. |
| Индольный тест | Расщепление триптофана с образованием индола | Красное кольцо после добавления реактива Ковача | Escherichia coli |
| Цитратный тест | Использование цитрата как единственного источника углерода | Рост и посинение среды Симмонса | Klebsiella spp., Enterobacter spp. |
| Уреазный тест | Гидролиз мочевины ферментом уреазой | Малиново-розовая окраска | Proteus spp. |
| Тест на сероводород | Восстановление серосодержащих соединений | Почернение среды | Salmonella spp., Proteus spp. |
Среда Кларка обеспечивает достаточное накопление метаболитов глюкозы, необходимых для достоверной постановки обеих реакций. Результаты оценивают только после установленного срока инкубации, поскольку преждевременный учёт может привести к ошибочной интерпретации кислотности или продукции ацетоина. Сочетание метил-рот и Фогеса–Проскауэра с другими тестами IMViC позволяет дифференцировать морфологически сходные грамотрицательные бактерии по особенностям их метаболизма.