2) гетерологичными
3) неспецифическими
4) видоспецифическими (+)
Защитная проба основана на реакции нейтрализации экзотоксина антитоксической сывороткой in vivo. Исследуемый материал или фильтрат культуры смешивают с сывороткой и вводят лабораторным мышам; сохранение животных при гибели контрольных мышей означает, что антитела связали и нейтрализовали летальный токсин. Первичная постановка позволяет установить принадлежность токсина к группе возбудителей, однако смеси сывороток недостаточно для окончательной видовой идентификации.
Поэтому далее проводят развернутую реакцию в параллельных пробах с отдельными видоспецифическими антитоксическими сыворотками против предполагаемых возбудителей газовой гангрены: Clostridium perfringens, C. novyi, C. septicum, C. histolyticum и других клостридий. Вид возбудителя устанавливают по тому, какая именно сыворотка предотвращает гибель мышей. Такой подход основан на специфичности антител к токсинам и антигенным компонентам определенного вида.
Термин видоспецифические характеризует направленность иммунологической реакции, а не происхождение или моноклональность антител. Сыворотка может быть гетерологичной по источнику получения, например лошадиной, но при этом оставаться видоспецифической по диагностическому действию. Неспецифические или только моноклональные сыворотки не обеспечивают необходимой схемы дифференциации возбудителей.
| Этап или объект исследования | Используемый материал | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Первичная защитная проба | Сыворотка против C. perfringens и смесь сывороток против других клостридий | Подтверждает наличие токсина, нейтрализуемого антитоксическими антителами, и ориентировочно определяет группу возбудителя |
| Положительный результат | Исследуемая группа мышей выживает, контрольные животные погибают | Свидетельствует о специфической нейтрализации токсина; необходим переход к уточняющей реакции |
| Развернутая реакция нейтрализации | Отдельные сыворотки против каждого предполагаемого вида | Позволяет дифференцировать клостридиальный токсин и установить видовую принадлежность возбудителя |
| Clostridium perfringens | Видоспецифическая антитоксическая сыворотка; учитывают альфа-токсин — фосфолипазу C | Типичны массивный отек и некроз мышц, газообразование, двойная зона гемолиза; положительная нейтрализация подтверждает токсигенный штамм |
| Clostridium novyi | Сыворотка против токсинов C. novyi | Рассматривается при злокачественном отеке и анаэробной инфекции мягких тканей; идентификация требует специфической нейтрализации |
| Clostridium septicum | Сыворотка против токсинов C. septicum | Возможен спонтанный мионекроз, выраженный отек и быстрое распространение инфекции; выживание только в этой пробе указывает на данный вид |
| C. histolyticum, C. sordellii и другие клостридии | Соответствующие видоспецифические антитоксические сыворотки | Используются для исключения редких возбудителей и уточнения этиологии при отрицательной нейтрализации сыворотками против наиболее частых видов |
Таким образом, видоспецифические сыворотки являются ключевым инструментом заключительного этапа биологической идентификации токсигенных клостридий. Результат реакции оценивают только с учетом контрольных животных и правильности постановки опыта. Серологическую нейтрализацию сопоставляют с микроскопией, анаэробным посевом, характеристиками колоний и современными методами идентификации, включая MALDI-TOF масс-спектрометрию или ПЦР. При клиническом подозрении на клостридиальный мионекроз лабораторное уточнение не должно задерживать неотложное хирургическое лечение и антибактериальную терапию.