2) 72
3) 24
4) 48 (+)
Окончательную оценку посевов на висмут-сульфитном агаре проводят через 48 часов инкубации, обычно при температуре 35–37 °C. Первичный просмотр через сутки позволяет выявить наиболее типичные колонии, однако за это время не все штаммы Salmonella формируют достаточно выраженные признаки роста. Дополнительные сутки необходимы для обнаружения медленно растущих вариантов и окончательной оценки изменений среды.
Висмут-сульфитный агар является селективно-дифференциальной средой: соли висмута и сульфита подавляют значительную часть сопутствующей кишечной микрофлоры, а продукты метаболизма сальмонелл, прежде всего сероводород, взаимодействуют с солями железа и висмута. В результате формируются серо-чёрные или чёрные колонии, иногда с металлическим блеском, нередко сопровождающиеся почернением окружающей среды. Оценка через 48 часов позволяет отличить истинный отрицательный результат от запоздалого или слабого роста.
Результат посева на данной среде имеет ориентировочное значение и не заменяет подтверждающую идентификацию. Подозрительные колонии пересеивают на неселективную среду, после чего проводят изучение культуральных и биохимических свойств, серологическую идентификацию с О- и Н-антисыворотками, а при необходимости молекулярное типирование. Отсутствие почернения не исключает сальмонеллу, поскольку отдельные штаммы продуцируют сероводород слабо или не образуют его.
| Этап исследования | Среда или метод | Основная цель | Диагностическая оценка |
|---|---|---|---|
| Предварительное накопление | Среда обогащения: селенитовая, тетратионатная или Раппапорта—Вассилиадиса | Повышение концентрации Salmonella при угнетении части сопутствующей микрофлоры | Само по себе не подтверждает наличие возбудителя; материал подлежит высеву на плотную селективную среду |
| Первичный высев | Висмут-сульфитный агар | Выделение подозрительных колоний и подавление конкурентной кишечной флоры | Оценивают форму, цвет, блеск колоний и изменение окраски среды |
| Промежуточный просмотр | Посев после примерно 24 часов инкубации | Выявление быстро растущих типичных колоний | Результат предварительный: слабый или поздний рост может быть ещё не распознаваем |
| Окончательная оценка первичного посева | Посев на висмут-сульфитном агаре после 48 часов | Регистрация поздно формирующихся колоний и полного проявления дифференциальных признаков | Срок окончательного чтения посева — 48 часов |
| Типичные признаки Salmonella | Колонии на висмут-сульфитном агаре | Оценка продукции сероводорода и устойчивости к селективным компонентам | Чёрные или серо-чёрные колонии, возможен металлический блеск и почернение среды |
| Дифференциальная оценка | Сопутствующая энтеробактериальная флора | Отличие сальмонелл от других грамотрицательных палочек | Рост может отсутствовать либо иметь нетипичную окраску; визуальные признаки не являются окончательной идентификацией |
| Подтверждение культуры | Пересев подозрительных колоний, биохимические и серологические тесты | Установление родовой и видовой принадлежности, при необходимости серовара | Диагноз подтверждают совокупностью результатов, а не только видом колонии на первичной среде |
Выдерживание полного регламентированного срока повышает чувствительность культурального метода. Особенно важно учитывать возможность позднего роста при небольшом количестве возбудителя в исходном материале или после предварительного обогащения. При обнаружении подозрительных колоний дальнейшая идентификация должна выполняться из чистой культуры. Таким образом, 48 часов — это срок окончательного чтения посева на висмут-сульфитном агаре, а не завершение всех этапов лабораторного подтверждения.