2) тест Эйкмана
3) оксидазный тест
4) тест индолообразования
При исследовании на общие колиформные бактерии (ОКБ) принадлежность выделенной колонии к грамнегативным бактериям можно быстро установить с помощью теста Грегерсена, или щелочного лизис-теста. На предметное стекло наносят суспензию культуры и добавляют раствор гидроксида калия обычно концентрацией около 3%. У грамнегативных бактерий разрушается наружная мембрана и тонкий слой пептидогликана, клетка лизируется, а высвободившаяся ДНК при перемешивании образует вязкую нить.
Грамположительные бактерии имеют плотный многослойный пептидогликановый слой, поэтому в тех же условиях не лизируются и нитевидной тягучести не дают. Для ОКБ положительный результат теста Грегерсена подтверждает ожидаемую грамнегативную принадлежность колонии и позволяет заменить этап окраски по Граму в качестве ориентировочного дифференциального признака. Однако окончательное заключение об ОКБ требует совокупной оценки морфологии, оксидазной реакции и способности ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа.
| Метод или критерий | Что определяет | Основной диагностический признак | Значение при исследовании ОКБ |
|---|---|---|---|
| Тест Грегерсена | Принадлежность бактерий к грамнегативной или грамположительной группе | Образование вязкой нити после обработки культуры 3% раствором KOH у грамнегативных бактерий | Быстрая альтернатива окраске по Граму при исследовании чистой культуры |
| Окраска по Граму | Строение клеточной стенки и тинкториальные свойства | Грамположительные клетки окрашиваются в фиолетовый, грамнегативные — в розово-красный цвет | Референтный морфотинкториальный метод, который может быть заменён тестом Грегерсена на ориентировочном этапе |
| Тест Эйкмана | Термотолерантность и способность к ферментации углеводов | Рост и газообразование при повышенной температуре, обычно около 44 °C | Используется для выявления термотолерантных колиформных бактерий, но не определяет окраску по Граму |
| Оксидазный тест | Наличие цитохром-c-оксидазы | Фиолетовое окрашивание реактива в течение короткого времени | ОКБ, как правило, оксидазоотрицательны; тест дифференцирует их от ряда неферментирующих грамотрицательных бактерий |
| Тест индолообразования | Способность расщеплять триптофан с образованием индола | Появление красного кольца после добавления реактива Ковача или Эрлиха | Помогает различать виды внутри группы, но не заменяет определение грампринадлежности |
| Основные признаки ОКБ | Принадлежность выделенной культуры к колиформным бактериям | Грамнегативные неспорообразующие палочки, оксидазоотрицательная реакция, ферментация лактозы с образованием кислоты и газа | Заключение формируется по комплексу культуральных, тинкториальных и биохимических признаков |
Тест Грегерсена особенно удобен для оперативного скрининга большого числа колоний. Его результаты следует оценивать на свежей чистой культуре, поскольку смешанный посев, избыток бактериальной массы или использование старых колоний могут привести к ошибочной интерпретации. Отрицательный результат не отменяет необходимости полноценной идентификации при несоответствии другим признакам ОКБ. Таким образом, правильный ответ основан на механизме щелочного лизиса клеток грамнегативных бактерий.