2) выдается качественный ответ
3) выдается количество фагов
4) анализ повторяют на удвоенном количестве воды
Колифаги — это бактериофаги, способные инфицировать индикаторные штаммы Escherichia coli. При посеве исследуемой воды методом газона их выявляют по образованию прозрачных зон лизиса — негативных колоний , возникающих вследствие размножения фага и разрушения бактериальных клеток. Контроль культуры содержит индикаторный штамм без исследуемой пробы и должен оставаться без зон лизиса.
Появление лизиса в контроле указывает на нарушение валидности постановки: возможна контаминация культуры фагами, спонтанный лизис, снижение стабильности индикаторного штамма, ошибка приготовления питательной среды или нарушение стерильности. В этих условиях нельзя определить, связаны ли зоны в опытной пробе именно с колифагами питьевой воды, поэтому количественный результат будет недостоверным. Увеличение объема исследуемой воды не устраняет дефект контроля; анализ проводят повторно после проверки культуры, среды, посуды, стерильности и правильности постановки контроля.
| Элемент постановки | Нормальный результат | Диагностическое значение | Действия |
|---|---|---|---|
| Контроль культуры без пробы | Сплошной рост индикаторного штамма, зоны лизиса отсутствуют | Подтверждает пригодность культуры и отсутствие фонового фаголизиса | Результаты опыта могут оцениваться |
| Контроль культуры с зонами лизиса | Самопроизвольные или фоновые бляшки | Положительный фон; контроль не соответствует требованиям | Результат анализа признают недействительным, постановку повторяют |
| Опытная проба с четкими зонами лизиса при нормальном контроле | Изолированные прозрачные бляшки на газоне | Признак наличия колифагов; число зон используют для количественного расчета | Выдают результат в установленных единицах объема |
| Опытная проба без зон лизиса при нормальном контроле | Равномерный рост индикаторной культуры | Колифаги не обнаружены в исследованном объеме или их концентрация ниже предела обнаружения | Выдают отрицательный результат по принятой методике |
| Мутный, неоднородный или частично разрушенный газон | Нечеткая картина вместо отдельных бляшек | Возможны токсичность пробы, дефект среды, повреждение культуры или техническая ошибка | Оценивают пригодность постановки; при необходимости повторяют исследование |
| Положительный контроль фага | Ожидаемый лизис чувствительной культуры | Подтверждает работоспособность индикаторного штамма и условий выявления | При отсутствии ожидаемого лизиса серию опыта не засчитывают |
Ключевым критерием достоверности является отсутствие лизиса в отрицательном контроле культуры. Контроль позволяет отделить специфическое действие колифагов в пробе от фоновых и технических артефактов. Поэтому при его нарушении нельзя выдавать ни качественный, ни количественный результат. Повторное исследование выполняют с валидной культурой и одновременно корректно поставленными контролями.