2) метод мембранной фильтрации
3) посев в пробирки с заливкой агаром
4) двуслойный способ заливки чашек Петри
Для определения общего микробного числа (ОМЧ) в воде централизованного водоснабжения применяют глубинный посев в чашки Петри. В исследуемую пробу, обычно в объёме 1 мл, добавляют расплавленную и охлаждённую питательную агаровую среду, тщательно перемешивают и после застывания инкубируют при регламентированной температуре. Колонии развиваются как внутри толщи агара, так и частично на его поверхности; их подсчитывают и выражают результат в количестве колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл воды.
Метод основан на количественном учёте жизнеспособных культивируемых аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, способных размножаться на неспецифической питательной среде в заданных условиях. Для санитарной оценки могут использоваться различные температурные режимы, например около 22 °C для более широкого спектра водной микрофлоры и около 37 °C для микроорганизмов, растущих при температуре тела человека. Глубинный посев обеспечивает внесение всей стандартной порции воды в известный объём среды и поэтому удобен для расчёта микробной обсеменённости.
Мембранная фильтрация преимущественно применяется при исследовании больших объёмов воды с низкой концентрацией микроорганизмов и при выявлении санитарно-показательных бактерий на селективных или дифференциально-диагностических средах. Посев в пробирки и двуслойная заливка не являются основным стандартизованным приёмом определения ОМЧ в данной ситуации: они либо затрудняют количественный подсчёт колоний, либо предназначены для специальных методик. Поэтому правильным является глубинный посев в чашки Петри.
| Подход | Основной принцип | Типичная диагностическая задача | Оценка применимости для ОМЧ |
|---|---|---|---|
| Глубинный посев в чашку Петри | Известный объём воды смешивают с расплавленным питательным агаром | Подсчёт всех выросших колоний на неспецифической среде | Стандартный количественный метод определения ОМЧ |
| Мембранная фильтрация | Большой объём воды пропускают через мембрану, которую затем помещают на агар | Концентрирование малых количеств бактерий, поиск санитарно-показательных микроорганизмов | Может использоваться по отдельным методикам, но не является искомым ответом в данной постановке |
| Поверхностный посев | Пробу наносят на поверхность уже застывшей среды | Работа с культурами, для которых важны условия поверхности агара | Менее пригоден для стандартного определения ОМЧ в малом объёме воды |
| Заливка агара в пробирках | Материал распределяют в жидкой среде внутри пробирки | Специальные культуральные или биохимические исследования | Не обеспечивает удобного стандартного подсчёта колоний в чашке |
| Двуслойная заливка | Используют два слоя питательной среды с различными свойствами | Специализированное выделение или дифференциация отдельных групп микроорганизмов | Не является рутинным методом определения общего микробного числа |
| Результат исследования | Подсчитывают колонии после инкубации с учётом объёма и разведения | Количественная характеристика микробной обсеменённости воды | Выражается в КОЕ/мл и интерпретируется по действующим санитарным нормативам |
ОМЧ характеризует только микроорганизмы, способные образовать видимые колонии в заданных условиях культивирования, поэтому не равно общему числу микробных клеток в воде. Выбор питательной среды, объёма пробы, температуры и продолжительности инкубации должен быть стандартизован. Для контроля качества централизованного водоснабжения показатель оценивают совместно с результатами выявления санитарно-показательных микроорганизмов. Именно воспроизводимость объёма посева и возможность прямого подсчёта колоний делают глубинный метод оптимальным для данной задачи.