2) метод мембранной фильтрации
3) посев в пробирки с заливкой агаром
4) двуслойный способ заливки чашек Петри
Общее микробное число (ОМЧ) характеризует количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, способных образовывать видимые колонии на питательном агаре. Базовым количественным методом является глубинный посев: определённый объём исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, заливают расплавленным агаром и перемешивают. Микробные клетки распределяются по всему объёму среды, поэтому колонии развиваются как на поверхности, так и в толще агара, а результат выражают в колониеобразующих единицах на единицу объёма — КОЕ/см³.
Согласно методике, обычно по 1 см³ пробы вносят в две параллельные чашки и добавляют 8–12 см³ питательного агара, охлаждённого до 45–50 °C. Такая температура сохраняет агар в жидком состоянии, но не должна вызывать значительной гибели исследуемых бактерий. После застывания посевы инкубируют при 37 ± 1 °C в течение 24 ± 2 часов, подсчитывают изолированные колонии и рассчитывают среднее количество КОЕ с учётом засеянного объёма.
Мембранная фильтрация позволяет концентрировать микроорганизмы из сравнительно большого объёма воды и может применяться как альтернативный способ определения ОМЧ, особенно при предполагаемой низкой обсеменённости. Однако в стандартной тестовой формулировке наиболее корректным считается классический глубинный посев в чашки Петри, непосредственно предназначенный для количественного учёта колоний в 1 см³ пробы. Посев в пробирки с агаром и двуслойная заливка используются для иных микробиологических задач и не являются рутинной базовой схемой определения ОМЧ воды.
| Метод или этап | Принцип | Значение при исследовании воды |
|---|---|---|
| Глубинный посев в чашки Петри | Пробу смешивают с расплавленным питательным агаром | Базовый способ прямого количественного определения ОМЧ |
| Параллельные посевы | Исследуют не менее двух одинаковых объёмов пробы | Снижают влияние случайной погрешности и неравномерного распределения бактерий |
| Температура агара 45–50 °C | Среда остаётся жидкой и может равномерно смешиваться с водой | Предотвращает преждевременное застывание и ограничивает термическое повреждение микроорганизмов |
| Инкубация при 37 ± 1 °C | Создаются условия для роста мезофильной микрофлоры | Обеспечивает формирование учитываемых колоний в течение регламентированного времени |
| Мембранная фильтрация | Микроорганизмы задерживаются на фильтре, который помещают на агар | Полезна для концентрации бактерий из большого объёма; возможна как альтернативная методика |
| Посев в пробирки с агаром | Рост происходит в столбике плотной или полужидкой среды | Применяется для специальных культуральных задач, но не является стандартным способом рутинного учёта ОМЧ |
| Двуслойная заливка | Посев покрывают дополнительным слоем агаризованной среды | Используется в отдельных методиках, например при работе с бактериофагами или для ограничения поверхностного роста |
ОМЧ является интегральным санитарно-микробиологическим показателем и отражает общую микробную нагрузку, но не устанавливает видовой состав микроорганизмов. Его увеличение может указывать на недостаточную эффективность водоподготовки, нарушения режима обеззараживания или накопление органических загрязнений. Нормальный результат ОМЧ не исключает присутствия отдельных патогенных или условно-патогенных микроорганизмов. Поэтому оценку безопасности проводят совместно с определением кишечной палочки, энтерококков, Pseudomonas aeruginosa и других регламентированных показателей.