2) A и C
3) A и B
4) D и E (+)
Правильный ответ — типы D и E. В классической токсикотипизации Clostridium perfringens тип D продуцирует α- и ε-токсины, а тип E — α- и ι-токсины. ε- и ι-токсины синтезируются в виде протоксинов, то есть биологически малоактивных предшественников, которые приобретают токсичность после протеолитического расщепления.
Добавление трипсина или панкреатина с инкубацией при 37 °C в течение 1 часа имитирует действие протеаз тонкой кишки и переводит протоксины в активную форму. ε-токсин обладает порообразующим действием и повышает проницаемость клеточных мембран, а ι-токсин является бинарным токсином: его ферментативный компонент ADP-рибозилирует актин и нарушает цитоскелет клетки. Поэтому после ферментативной активации токсичность фильтрата культуры становится более выраженной, что используется как функциональный признак при классическом токсикотипировании.
Активация протоксинов не заменяет комплексное подтверждение возбудителя, а является этапом дифференциальной диагностики. В исследовании обычно сопоставляют активность неактивированного и обработанного фильтрата, проводят реакцию нейтрализации специфическими антитоксическими сыворотками и, при необходимости, определяют гены токсинов методом ПЦР. Именно сочетание протеазозависимой активации ε- и ι-токсинов лежит в основе выбора типов D и E.
| Токсикотип | Основные токсины или гены | Роль протеолитической активации | Характерная диагностическая особенность |
|---|---|---|---|
| A | α-токсин, ген cpa | Не является определяющим признаком | Наиболее частый вариант при пищевых токсикоинфекциях; при наличии cpe относится к энтеротоксигенным вариантам |
| B | α-, β- и ε-токсины; cpa, cpb, etx | ε-протоксин может активироваться протеазами | Для отличия от типа D необходима оценка полного профиля токсинов и реакций нейтрализации |
| C | α- и β-токсины; cpa, cpb | β-токсин протеазочувствителен и не является критерием активации ε- или ι-протоксина | Связан с некротическим энтеритом и энтеротоксемией |
| D | α- и ε-токсины; cpa, etx | Активация ε-протоксина трипсином или панкреатином | После обработки повышается активность ε-токсина; классический маркер типа D |
| E | α- и ι-токсины; cpa, iap | Активация ι-протоксина протеазами | Выявление активного ι-токсина поддерживает тип E |
| F | α-токсин и энтеротоксин CPE; cpa, cpe | Не является диагностически значимой для типа F | Тип связан с пищевой диареей и энтеротоксином CPE |
| G | α-токсин и NetB; cpa, netB | Не используется как критерий типа G | Современный токсикотип, преимущественно связанный с некротическим энтеритом птиц |
В современной лабораторной практике результат ферментативной активации трактуют совместно с ПЦР-определением генов токсинов и серологической нейтрализацией. Наличие гена etx встречается не только у типа D, поэтому одной реакции активации недостаточно для окончательного токсикотипирования. Для расследования пищевой вспышки дополнительно сопоставляют токсикогенность изолята, количество возбудителя в продукте, наличие энтеротоксина и клиническую картину у пострадавших.