2) реакции непрямой гемагглютинации
3) реакции агглютинации на стекле (+)
4) иммуноферментном анализе
О-антиген сальмонелл является соматическим антигеном, связанным с липополисахаридом наружной мембраны клеточной стенки. Он относительно термостабилен и сохраняет антигенные свойства после стандартной обработки культуры. Для его выявления используют специфические поливалентные и моновалентные О-сыворотки: при смешивании суспензии чистой культуры с сывороткой на предметном стекле образуются видимые хлопья агглютината. Поэтому именно реакция агглютинации на стекле является классическим методом определения О-антигенов при серотипировании сальмонелл.
Серотипирование проводят по схеме Кауффмана—Уайта—Ле Минора: сначала устанавливают О-группу по соматическим антигенным факторам, затем определяют Н-антиген по флагеллярным антигенам, при необходимости оценивая также Vi-антиген. Оценка реакции требует контроля с физиологическим раствором, поскольку аутоагглютинация или использование шероховатой культуры может привести к ложной интерпретации. Крупнозернистая агглютинация с соответствующей О-сывороткой в течение короткого времени свидетельствует о наличии гомологичного антигенного фактора.
| Объект исследования | Природа антигена | Основной метод выявления | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|
| О-антиген | Соматический, полисахаридный компонент ЛПС | Агглютинация на стекле с О-сыворотками | Определение серологической группы сальмонеллы |
| Н-антиген | Флагеллярный, белковый; может проявляться в разных фазах | Агглютинация, чаще в пробирке, с Н-сыворотками | Уточнение серовара после установления О-группы |
| Vi-антиген | Капсульный поверхностный антиген | Специфическая агглютинация с Vi-сывороткой | Может маскировать О-антиген, особенно у отдельных сероваров |
| Поливалентная О-сыворотка | Содержит антитела к нескольким О-факторам | Первичная реакция на стекле | Ориентировочное отнесение изолята к О-группе |
| Моновалентная О-сыворотка | Антитела к определённому антигенному фактору | Подтверждающая реакция на стекле | Уточнение антигенной формулы штамма |
| Контроль специфичности | Проверка отсутствия неспецифического склеивания клеток | Суспензия культуры с физиологическим раствором и контрольными сыворотками | Исключение аутоагглютинации и ложноположительного результата |
Латекс-агглютинация, реакция непрямой гемагглютинации и иммуноферментный анализ могут применяться для выявления отдельных антигенов или антител, но не являются стандартным этапом рутинного определения О-антигенной формулы сальмонелл. При отсутствии агглютинации следует учитывать наличие Vi-капсулы, грубую или аутоагглютинирующую культуру и нарушение условий постановки реакции. Окончательное заключение о сероваре делают только после сопоставления результатов определения О- и Н-антигенов с диагностической схемой сальмонелл.