2) в течение 1-2 минут, мягко покачивая стекло (+)
3) после 10 минутной выдержки при комнатной температуре
4) после 20 минут инкубации в термостате
Реакция агглютинации на стекле при серотипировании сальмонелл относится к быстрым ориентировочным реакциям. При смешивании бактериальной взвеси со специфической диагностической сывороткой антитела связываются с соответствующими поверхностными антигенами микроорганизма и образуют видимые хлопья. При наличии антигенного соответствия агглютинат формируется быстро, поэтому результат оценивают в течение 1–2 минут при мягком покачивании стекла.
Увеличение времени наблюдения снижает специфичность исследования: подсыхание капли, повышение концентрации солей и механическое скопление бактериальных клеток могут создавать картину ложноположительной агглютинации. Параллельно обязательно исследуют контрольную каплю бактериальной взвеси с изотоническим раствором натрия хлорида; появление хлопьев в контроле свидетельствует о спонтанной аутоагглютинации и делает результат недостоверным. Для типирования используют свежую чистую культуру сальмонелл и набор поливалентных, групповых и монорецепторных сывороток.
| Компонент исследования | Диагностическое значение | Особенности учета |
|---|---|---|
| О-антигены | Термостабильные соматические антигены липополисахарида; определяют принадлежность к серогруппе | Агглютинация обычно мелкозернистая, проводится с поливалентными и групповыми О-сыворотками |
| Н-антигены | Термолабильные жгутиковые антигены; обеспечивают последующую дифференциацию серовара | Учитывают фазовую вариабельность жгутиковых антигенов |
| Vi-антиген | Поверхностный капсульный антиген, наиболее характерный для Salmonella Typhi | Может маскировать О-антигены и препятствовать агглютинации с О-сывороткой |
| Положительная реакция | Появление отчетливых хлопьев или зерен при просветлении окружающей жидкости | Возникает в опытной капле в пределах 1–2 минут |
| Отрицательная реакция | Сохранение равномерной мутной бактериальной суспензии без хлопьев | Результат признают отрицательным только при отсутствии агглютинации в установленное время |
| Контроль с физиологическим раствором | Исключение спонтанной агрегации бактериальных клеток | Контрольная взвесь должна оставаться однородной |
| Поздняя агглютинация | Чаще связана с подсыханием капли или неспецифическим взаимодействием | Изменения, появившиеся после нормативного времени, не учитывают |
Антигенную формулу выделенной культуры устанавливают последовательно: сначала подтверждают реакцию с поливалентной сывороткой, затем определяют О-группу и тип Н-антигенов. Полученные данные сопоставляют со схемой Кауфмана–Уайта–Ле Минора, используемой для классификации сероваров Salmonella. Быстрый учет реакции и обязательное применение контроля позволяют отличить истинную иммунную агглютинацию от неспецифического склеивания клеток. Окончательная идентификация должна учитывать также культуральные, биохимические и при необходимости молекулярно-генетические характеристики изолята.