2) энтеротоксина
3) гемолизина
4) лейкоцидина
Реакцию нейтрализации на мышах применяют для выявления ботулинического нейротоксина и определения его серологического типа. Исследуемый материал смешивают с типоспецифической ботулинической антитоксической сывороткой, после чего вводят лабораторным животным; параллельно ставят контроль без антитоксина. Если сыворотка связывает соответствующий токсин, мыши остаются живы и у них не развивается характерный синдром, что подтверждает наличие ботулотоксина данного типа.
Ботулинический токсин блокирует пресинаптическое высвобождение ацетилхолина в нервно-мышечных синапсах, расщепляя белки комплекса SNARE. Следствием становится периферический вялый паралич, обычно начинающийся с офтальмоплегии, диплопии, птоза и нарушения глотания и распространяющийся в нисходящем направлении. Гибель или развитие паралича у контрольных животных при защите животных, получивших смесь с соответствующей антитоксической сывороткой, является критерием положительной реакции нейтрализации.
Метод имеет биологическую основу и одновременно демонстрирует специфичность взаимодействия токсин—антитоксин . Энтеротоксины оценивают преимущественно иммунологическими, молекулярно-генетическими или клеточными методами, тогда как гемолизины выявляют по зоне гемолиза на кровяных средах, а лейкоцидины — по цитотоксическому действию на лейкоциты. Поэтому именно ботулотоксин является правильным объектом классической реакции нейтрализации на мышах.
| Фактор | Основное биологическое действие | Типичный диагностический подход | Признак подтверждения |
|---|---|---|---|
| Ботулинический нейротоксин | Блокада высвобождения ацетилхолина; нисходящий вялый паралич | Нейтрализация специфической антитоксической сывороткой в биологической модели; также иммунологические и молекулярные методы | Защита мышей соответствующей сывороткой при заболевании или гибели контрольных животных |
| Энтеротоксин | Нарушение функций энтероцитов, секреции и всасывания; диарейный синдром | ИФА, ПЦР генов токсигенности, культуральные и клеточные тесты | Обнаружение токсина или его гена в клиническом материале либо подтверждение энтеротоксического эффекта |
| Гемолизин | Повреждение мембран эритроцитов с выходом гемоглобина | Посев на кровяной агар и оценка гемолитической активности | Прозрачная зона полного или частичного гемолиза вокруг колоний |
| Лейкоцидин | Цитолиз или функциональное повреждение лейкоцитов, преимущественно нейтрофилов | Клеточные тесты на лейкоцитах, определение генов токсина | Снижение жизнеспособности или лизис клеток-мишеней |
| Нейтрализация токсина | Специфическое связывание токсина антителами и утрата его биологической активности | Сравнение токсического эффекта в присутствии и отсутствии антитоксической сыворотки | Отсутствие специфического поражения у защищённой тест-системы |
| Серотипирование ботулотоксина | Различие токсинов по антигенной специфичности | Постановка параллельных реакций с сыворотками против типов A, B, E и других | Нейтрализация токсичности только соответствующей типоспецифической сывороткой |
В современной лабораторной диагностике биологический тест дополняют выявлением генов bont и иммунологическим определением токсина. При подозрении на ботулизм лечение антитоксином начинают как можно раньше, не ожидая окончательного лабораторного подтверждения. Антитоксин нейтрализует циркулирующий токсин, но не устраняет уже необратимо сформировавшуюся блокаду нервных окончаний. Поэтому важны раннее распознавание заболевания, поддержка дыхания и соблюдение требований биологической безопасности.