2) расположение жгутиков
3) подвижность микроорганизмов (+)
4) внутренние структуры бактерий
Тёмнопольная микроскопия позволяет наблюдать живые микроорганизмы без предварительного окрашивания и оценивать их движение в нативном препарате. При таком способе освещения прямые лучи не попадают в объектив, а регистрируется только свет, рассеянный объектами, поэтому микроорганизмы выглядят яркими на тёмном фоне. Это особенно удобно для тонких, слабо преломляющих свет бактерий, которые трудно различимы при обычной световой микроскопии.
Диагностически важным преимуществом метода является возможность оценить характер подвижности: поступательное, вращательное, сгибательное или иное активное перемещение клетки. Следует отличать истинную подвижность от броуновского движения, при котором частицы совершают беспорядочные колебания без направленного перемещения. Непосредственное изучение пилей, тонкого строения жгутиков и внутриклеточных структур требует других методов, прежде всего электронной микроскопии, специальных способов окрашивания или молекулярно-структурных исследований.
| Метод | Основная диагностическая возможность | Характерный объект или признак |
|---|---|---|
| Тёмнопольная микроскопия | Наблюдение живых микроорганизмов и оценка их подвижности | Яркие клетки на тёмном фоне, активное направленное движение |
| Фазово-контрастная микроскопия | Исследование неокрашенных живых клеток | Контрастирование прозрачных структур за счёт различий фаз света |
| Световая микроскопия окрашенных препаратов | Оценка формы, размеров и взаимного расположения бактерий | Кокки, палочки, цепочки, скопления после окраски |
| Специальные методы окраски жгутиков | Выявление жгутикового аппарата | Определение характера и расположения жгутиков |
| Электронная микроскопия | Изучение ультраструктуры бактериальной клетки | Мембраны, пили, жгутики и другие субмикроскопические образования |
| Нативный препарат в проходящем свете | Ориентировочная оценка жизнеспособности и движения | Менее контрастное изображение, возможна путаница с броуновским движением |
Тёмнопольный метод имеет особое значение при исследовании тонких спиралевидных микроорганизмов, включая спирохеты, которые плохо видны при стандартной микроскопии без специальных методов подготовки препарата. Сохранение микроорганизмов в живом состоянии делает возможной оценку естественной кинетики клеток. При интерпретации результата необходимо учитывать температуру, вязкость среды и возраст культуры, поскольку эти факторы могут изменять выраженность подвижности. Поэтому тёмнопольная микроскопия служит преимущественно методом морфологического и функционального наблюдения, а не изучения тонкой ультраструктуры бактерий.