2) формировать лактозоположительные колонии
3) образовывать β-глюкоронидазу
4) ферментировать мочевину
Согласно ГОСТ 30726-2001, при биохимическом подтверждении принадлежности выделенной культуры к Escherichia coli определяют утилизацию цитрата. Для этого культуру высевают на среду Симмонса либо в среду Козера. Поэтому отмеченный вариант верен как указание на применение среды Симмонса в схеме идентификации, однако типичный для E. coli результат теста является отрицательным: бактерия не утилизирует цитрат как единственный источник углерода.
При положительной цитратной реакции микроорганизм размножается на среде, образует щелочные продукты метаболизма, а индикатор бромтимоловый синий изменяет цвет среды с зеленого на синий. Для E. coli характерны отсутствие выраженного роста и сохранение исходной зеленой окраски. Следовательно, диагностическое значение имеет не сам факт посева на среду Симмонса, а выявление цитрат-отрицательного фенотипа.
Формирование лактозоположительных колоний является важным предварительным культуральным признаком, но не обеспечивает видовой идентификации, поскольку лактозу ферментируют и другие энтеробактерии. Определение β-глюкуронидазы применяется в ряде современных хромогенных методик, однако не является основным критерием идентификации, установленным данным ГОСТ. Уреазная реакция у большинства штаммов E. coli отрицательная, но определение ферментации мочевины не включено в предусмотренный стандартом основной набор подтверждающих тестов.
| Диагностический признак | Типичный результат для E. coli | Интерпретация |
|---|---|---|
| Утилизация цитрата на среде Симмонса | Отрицательная | Рост отсутствует, среда сохраняет зеленую окраску |
| Рост на среде Эндо | Розовые или темно-красные колонии, нередко с металлическим блеском | Предварительный признак ферментации лактозы |
| Ферментация лактозы при 44 ± 1 °C | Положительная | Один из основных подтверждающих критериев по ГОСТ |
| Образование индола | Положительное | Свидетельствует о расщеплении триптофана триптофаназой |
| Реакция с метиловым красным | Положительная | Отражает интенсивное кислотообразование при ферментации глюкозы |
| Реакция Фогеса–Проскауэра | Отрицательная | Ацетоин не образуется в диагностически значимом количестве |
| Образование сероводорода | Отрицательное | Почернение среды Клиглера или трехсахарного агара отсутствует |
Идентификация E. coli проводится по совокупности культуральных, морфологических и биохимических признаков, а не по одному тесту. Среда Симмонса используется для подтверждения неспособности типичных штаммов утилизировать цитрат. Появление роста с посинением среды соответствует положительной цитратной реакции и заставляет рассматривать другие представители порядка Enterobacterales. Окончательный вывод делают при сочетании цитрат-отрицательной реакции с образованием индола, положительной реакцией с метиловым красным, ферментацией лактозы и отсутствием ацетоина.