2) метод дисков
3) метод абсолютных концентраций
4) Е-тест
Современным референсным подходом к определению чувствительности Candida spp. к антимикотикам является метод серийных разведений, прежде всего стандартизованный метод микроразведений в жидкой питательной среде. Исследуемый препарат вносится в ряд лунок в возрастающих концентрациях, после чего добавляется стандартизованная суспензия грибов. Основным результатом является минимальная подавляющая концентрация (МПК, MIC) — наименьшая концентрация антимикотика, препятствующая видимому росту Candida.
Полученное значение МПК сопоставляют с клиническими пограничными значениями, установленными с учётом вида Candida, конкретного препарата, фармакокинетики и фармакодинамики. Это позволяет классифицировать изолят как чувствительный, чувствительный при повышенной экспозиции или устойчивый; для некоторых комбинаций гриб–препарат применяются видоспецифические критерии. Метод обладает высокой воспроизводимостью и используется в стандартах CLSI и EUCAST, поэтому считается основой лабораторного определения фенотипической чувствительности.
Диско-диффузионный метод и градиентный Е-тест могут применяться как стандартизованные альтернативы или дополнительные методы, однако их результаты зависят от условий диффузии препарата и не всегда полностью сопоставимы с референсной МПК. Метод абсолютных концентраций имеет преимущественно историческое значение и уступает микроразведениям по стандартизации и универсальности.
| Метод | Основной результат | Диагностическая характеристика | Практическое значение |
|---|---|---|---|
| Серийные разведения в бульоне | МПК (MIC) | Количественная оценка подавления роста при точно заданных концентрациях препарата | Референсный метод для Candida spp.; основа интерпретации по CLSI/EUCAST |
| Микроразведения | МПК в микропланшете | Миниатюризированный вариант серийных разведений с параллельным исследованием нескольких препаратов | Удобен для автоматизации и проведения панелей чувствительности |
| Диско-диффузионный метод | Диаметр зоны задержки роста | Оценивает диффузию антимикотика из диска в агар | Применим при соблюдении стандартизованных условий, но не даёт прямого значения МПК |
| Е-тест | Градиентная МПК | Место пересечения эллипса подавления роста с градиентной шкалой на полоске соответствует МПК | Полезен как альтернативный или подтверждающий метод; возможны расхождения с референсной методикой |
| Метод абсолютных концентраций | Рост или отсутствие роста на среде с фиксированной концентрацией | Сравнение роста на контрольной и содержащей препарат среде | Менее стандартизован и используется ограниченно |
| Интерпретация МПК | Категория чувствительности | Сопоставление МПК с эпидемиологическими или клиническими порогами | Учитывает вид Candida и конкретный антимикотик; необходима для выбора терапии |
Особое значение имеет правильная стандартизация инокулюма, состава среды, времени инкубации и критерия визуальной оценки роста. Для азолов, эхинокандинов и амфотерицина B применяются различные особенности определения конечной точки. Выявление повышенной МПК, особенно у Candida glabrata и Candida auris, требует видовой идентификации и оценки возможной лекарственной устойчивости. Результат теста следует интерпретировать совместно с клиническими данными и локализацией кандидозной инфекции.