2) учет результата
3) добавление раствора специфических антитоксических антител к раствору токсина
4) введение реакционной смеси морским свинкам (+)
Третьим этапом реакции нейтрализации дифтерийного токсина in vivo является введение предварительно подготовленной реакционной смеси морским свинкам. До этого специфические антитоксические антитела смешивают с токсином и выдерживают определённое время, чтобы произошло их связывание. После введения смеси в организм животного оценивают, сохранилась ли биологическая активность токсина.
Механизм реакции основан на образовании комплекса токсин–антитело . Антитоксин блокирует участки токсина, необходимые для связывания с клеточными рецепторами и проникновения в клетки; вследствие этого токсин не вызывает характерного повреждения тканей и системного токсического эффекта. Если антител недостаточно или они отсутствуют, у морской свинки развиваются местные и общие проявления токсического действия, включая отёк, некротические изменения и, при значимой дозе, гибель животного.
| Этап или контроль | Содержание | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| Подготовка токсина | Используют стандартизированное количество дифтерийного токсина | Обеспечивает сопоставимость результатов и заданную токсическую нагрузку |
| Внесение антитоксина | К токсину добавляют специфические антитоксические антитела | Создаются условия для иммунологической нейтрализации токсина |
| Инкубация смеси | Компоненты выдерживают при заданной температуре в течение установленного времени | Обеспечивается связывание антител с токсином и формирование иммунного комплекса |
| Введение смеси животным | Реакционную смесь вводят чувствительным морским свинкам | Это третий этап; позволяет проверить сохранение или утрату токсигенной активности in vivo |
| Наблюдение за животными | Оценивают местную реакцию, общее состояние и выживаемость | Отсутствие токсических проявлений свидетельствует о нейтрализации |
| Контроль токсина | Животным вводят токсин без антитоксина | Подтверждает чувствительность биологической тест-системы и активность токсина |
| Контроль специфичности | Проверяют действие антитоксина и компонентов реакции без активного токсина | Исключает неспецифическое повреждение, связанное с процедурой или препаратом антител |
Таким образом, введение смеси животным — это этап биологической проверки результата нейтрализации, а не этап его окончательной оценки. Учет реакции выполняют после периода наблюдения, когда регистрируют наличие или отсутствие токсического эффекта. Валидность исследования определяется также результатами контрольных постановок.