2) Романовскому – Гимзе
3) Нейссеру (+)
4) Граму
Для бактериоскопической диагностики дифтерии применяется окраска по Нейссеру, позволяющая выявить метахроматические зёрна волютина (зерна Бабеша—Эрнста) в клетках Corynebacterium diphtheriae. Эти включения содержат полифосфаты и окрашиваются в тёмно-синий или почти чёрный цвет, тогда как цитоплазма бактерии приобретает желтовато-коричневый оттенок. Сам микроорганизм имеет вид полиморфной, часто булавовидно утолщённой грамположительной палочки, клетки располагаются под углом друг к другу, формируя V- и L-образные скопления.
Выявление метахроматических зёрен является характерным диагностическим признаком коринебактерий и повышает вероятность обнаружения C. diphtheriae в мазке из ротоглотки, носа или с поверхности поражённых участков. Окраска по Граму также демонстрирует грамположительные палочки, однако не позволяет столь наглядно оценить волютиновые включения; окраска по Цилю—Нильсену предназначена преимущественно для кислотоустойчивых микобактерий, а метод Романовского—Гимзы не является стандартным специальным методом выявления возбудителя дифтерии. Бактериоскопия имеет ориентировочное значение и должна дополняться выделением культуры и определением токсигенности штамма.
| Метод или признак | Что выявляет | Диагностическое значение при подозрении на дифтерию |
|---|---|---|
| Окраска по Нейссеру | Метахроматические зёрна волютина в клетках коринебактерий | Специальный бактериоскопический метод; поддерживает идентификацию C. diphtheriae |
| Морфология C. diphtheriae | Полиморфные булавовидные палочки, V- и L-образные скопления | Характерный ориентировочный признак в мазке |
| Окраска по Граму | Грамположительные палочки | Подтверждает принадлежность к грамположительным бактериям, но недостаточно специфична |
| Окраска по Цилю—Нильсену | Кислотоустойчивые микобактерии | Не является основным методом диагностики дифтерии |
| Культуральное исследование | Рост коринебактерий на селективных средах, в том числе теллуритсодержащих | Необходимо для выделения и видовой идентификации возбудителя |
| Определение токсигенности | Продукция дифтерийного токсина или наличие гена tox | Ключевой критерий эпидемиологической и клинической значимости изолята |
Наличие метахроматических зёрен не доказывает, что штамм продуцирует дифтерийный токсин. Окончательное заключение основывают на совокупности результатов бактериоскопии, культурального исследования и тестирования токсигенности. Материал желательно брать до начала антибактериальной терапии, поскольку лечение может снизить вероятность выделения возбудителя. При клиническом подозрении на дифтерию обследование и противоэпидемические мероприятия начинают без ожидания полного лабораторного подтверждения.