2) наличии зерен волютина
3) наличии у некоторых бактерий миколовых кислот
4) наличии галактоманнана (+)
Метод Мак-Мануса представляет собой вариант PAS-реакции (периодическая кислота — реактив Шиффа), выявляющей полисахаридные компоненты клеточных структур. Периодическая кислота окисляет углеводные фрагменты с соседними гидроксильными группами до альдегидов, после чего реактив Шиффа образует с ними ярко-розовое или малиново-красное окрашивание. У грибов важным субстратом реакции является галактоманнан — полисахарид клеточной стенки, поэтому элементы мицелия и дрожжеподобные клетки хорошо визуализируются.
Таким образом, дифференциация при этой микроскопии основана на химическом составе клеточной стенки, а не на антигенной специфичности микроорганизма. Метод позволяет обнаруживать гифы, псевдогифы, конидии и дрожжевые клетки в патологическом материале, однако сам по себе не обеспечивает надежной видовой идентификации. Положительная PAS-реакция может быть обусловлена и другими углеводсодержащими структурами, поэтому результат оценивают совместно с морфологией, культуральными и молекулярными исследованиями.
Остальные признаки относятся к иным диагностическим принципам. Антигенные различия выявляют серологическими или иммунологическими методами, зерна волютина — специальной окраской по Нейссеру, а миколовые кислоты — кислотоустойчивостью при окраске по Цилю—Нильсену. Поэтому для метода Мак-Мануса правильным является указание на наличие галактоманнана.
| Признак или метод | Объект выявления | Химическая основа | Типичный результат | Диагностическое значение |
|---|---|---|---|---|
| Окраска по Мак-Манусу, PAS | Полисахариды клеточных стенок и внутриклеточных структур | Окисление углеводных групп периодной кислотой с последующей реакцией Шиффа | Розово-малиновое окрашивание | Обнаружение грибковых элементов в клиническом материале |
| Галактоманнан | Клеточная стенка ряда грибов, особенно плесневых | Наличие углеводных фрагментов, доступных для PAS-реакции | Интенсивное окрашивание гиф и дрожжевых форм | Морфологическое подтверждение грибковой природы структуры |
| Антигенные различия | Специфические антигены микроорганизмов | Связывание антигена с антителом | Реакция агглютинации, преципитации или иммунофлуоресценции | Серологическая идентификация и типирование |
| Зерна волютина | Полифосфатные включения, характерные для некоторых бактерий | Специальное окрашивание метахроматических гранул | Темно-синие или фиолетовые зерна | Распознавание коринебактерий и близких морфологических форм |
| Миколовые кислоты | Липидный слой клеточной стенки микобактерий | Высокая устойчивость к обесцвечиванию кислотно-спиртовой смесью | Красные кислотоустойчивые палочки на контрастном фоне | Выявление микобактерий при окраске по Цилю—Нильсену |
| Морфология грибов | Гифы, псевдогифы, почкующиеся клетки и споры | Сочетание PAS-позитивной клеточной стенки и характерной формы | Четко контрастирующие грибковые структуры | Ориентировочная дифференциация микозов |
Положительная PAS-реакция особенно полезна при исследовании биоптатов, мокроты, соскобов и других материалов, где грибковые элементы могут быть малочисленными. Интенсивность окрашивания зависит от состава клеточной стенки и качества фиксации материала. Для установления вида возбудителя необходимы культуральное исследование, MALDI-TOF-масс-спектрометрия или молекулярно-генетические методы. При подозрении на инвазивный аспергиллез микроскопию дополняют определением галактоманнана в сыворотке или бронхоальвеолярном лаваже.