2) иммуноферментного анализа
3) полимеразной цепной реакции (+)
4) непрямой реакции иммунофлюоресценции
Реаранжировка генов Т-клеточного рецептора формируется в процессе созревания Т-лимфоцитов вследствие соматической перестройки участков V, D и J. Для каждой Т-клетки такое сочетание участков является уникальным; поэтому при реактивном воспалении выявляется множество различных перестроек, а при пролиферации клеток одного клона — преимущественно идентичная последовательность. Определение клональности Т-клеточной популяции имеет особое значение при диагностике кожных Т-клеточных лимфом, включая грибовидный микоз и синдром Сезари.
Полимеразная цепная реакция позволяет амплифицировать вариабельные участки генов TCR, чаще TCR-γ и TCR-β, с использованием праймеров, комплементарных консервативным областям. Полученный продукт оценивают по размеру ампликонов, например методом капиллярного электрофореза, либо секвенируют. Наличие преобладающего ампликона или идентичной последовательности в повторных образцах свидетельствует о клональной перестройке и поддерживает диагноз лимфопролиферативного заболевания.
Гистологическое исследование оценивает архитектуру ткани и цитологические особенности инфильтрата, но не устанавливает структуру генов TCR. Иммуноферментный анализ и непрямая реакция иммунофлюоресценции выявляют антигены или антитела, а не нуклеотидные последовательности реаранжированного гена. При этом обнаружение клональности не является самостоятельным доказательством злокачественности: результат интерпретируют совместно с клинической картиной, гистологией, иммунным фенотипированием и данными о динамике заболевания.
| Метод или признак | Что определяется | Диагностическое значение |
|---|---|---|
| ПЦР генов TCR | Клональные перестройки локусов TCR-γ, TCR-β и других участков рецептора | Основной молекулярный метод оценки клональности Т-клеточного инфильтрата |
| Капиллярный электрофорез ампликонов | Распределение продуктов ПЦР по размеру | Один или несколько доминирующих пиков характерны для клональной популяции; широкий спектр пиков чаще соответствует поликлональному ответу |
| Секвенирование TCR нового поколения | Нуклеотидная последовательность и частота отдельных клонов | Повышает чувствительность и позволяет отслеживать один и тот же клон в разных биологических образцах |
| Гистологическое исследование | Архитектура инфильтрата, эпидермотропизм, атипия лимфоцитов | Не выявляет реаранжировку непосредственно, но необходимо для морфологической верификации лимфомы |
| Иммуногистохимическое исследование | Экспрессию CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8 и других маркеров | Определяет иммунный фенотип и возможную утрату пан-Т-клеточных антигенов; требует сопоставления с результатами ПЦР |
| Иммуноферментный анализ и непрямая иммунофлюоресценция | Антигены, антитела или циркулирующие иммунные комплексы | Не предназначены для установления генетической перестройки TCR и определения клональности |
Наиболее информативным материалом служит биоптат кожи, а при системном процессе дополнительно исследуют кровь и лимфатические узлы. Ложноотрицательный результат возможен при малом количестве опухолевых клеток, некачественной ДНК или использовании неподходящего набора праймеров. Клональная перестройка может выявляться и при некоторых хронических воспалительных дерматозах, поэтому она должна подтверждаться совокупностью клинико-морфологических и иммунологических признаков.