2) 1 час при температуре 37ºС
3) нагретыми до 38ºС
4) в холодильнике при 2-6ºС
Правильный вариант — хранение при комнатной температуре. После удаления семенной плазмы сперматозоиды находятся в промывочной или культуральной среде, из которой удалены белки и антиоксидантные компоненты эякулята. При температуре около 20–25 °C снижается интенсивность клеточного метаболизма и образования активных форм кислорода, поэтому при кратковременном ожидании лучше сохраняются подвижность и целостность плазматической мембраны.
Для ИКСИ полноценная капацитация и акросомная реакция не требуются: сперматозоид вводят непосредственно в ооцит, минуя взаимодействие с клетками кумулюса, связывание с зоной пеллюцида и проникновение через нее. Продолжительное пребывание очищенной спермы при 37 °C может ускорять метаболические процессы, преждевременную капацитацию, акросомные изменения и окислительное повреждение. Поэтому подготовленную сперму до микроманипуляции держат при контролируемой комнатной температуре и используют без неоправданной задержки.
Охлаждение до 2–6 °C для данного этапа не применяется, поскольку холодовой шок вызывает изменения липидного состава мембран и снижение подвижности. Нагревание до 38 °C создает риск гипертермического повреждения, тогда как 37 °C является стандартной температурой преимущественно для ооцитов, эмбрионов и культуральных систем. Конкретные сроки хранения и допустимый диапазон температуры должны соответствовать валидированной стандартной операционной процедуре лаборатории.
| Температурный режим | Воздействие на сперматозоиды | Применение перед ИКСИ |
|---|---|---|
| Комнатная температура, примерно 20–25 °C | Умеренная интенсивность метаболизма, ограничение окислительного стресса, сохранение подвижности при кратковременном хранении | Предпочтительный режим после отделения от семенной плазмы до микроманипуляции |
| 37 °C | Физиологическая температура усиливает метаболизм; при длительном ожидании возможны преждевременная капацитация и накопление активных форм кислорода | Не является стандартным режимом хранения очищенной спермы перед ИКСИ |
| 38 °C и выше | Гипертермическое воздействие, повреждение мембран и митохондрий, снижение жизнеспособности и подвижности | Не допускается; не дает преимуществ для оплодотворения |
| 2–6 °C | Холодовой шок, изменение текучести мембран, ухудшение прогрессивной подвижности и функциональной активности | Не применяется для кратковременного хранения сперматозоидов перед ИКСИ |
| Длительное ожидание независимо от температуры | Постепенное снижение подвижности, рост окислительного повреждения и вариабельности качества образца | Следует минимизировать интервал между подготовкой и инъекцией |
| Температура ооцитов и культуральных капель | Поддержание физиологических условий для ооцита и предотвращение температурного стресса во время процедуры | Ооциты и рабочие среды могут поддерживаться при 37 °C отдельно от суспензии сперматозоидов |
Таким образом, выбор комнатной температуры относится именно к очищенной сперме, ожидающей отбора и введения в ооцит. ИКСИ не требует предварительной физиологической капацитации сперматозоида, поэтому дополнительное длительное прогревание нецелесообразно. Отдельное поддержание ооцитов и культуральных капель при 37 °C не изменяет этого правила. Главными критериями качества перед инъекцией остаются сохраненная подвижность, жизнеспособность и отсутствие выраженных признаков дегенерации.