2) контрольная аспирация (+)
3) тестовая сепарация
4) контрольная сепарация
При ИКСИ контроль введения сперматозоида в ооплазму осуществляется посредством контрольной аспирации. После фиксации ооцита удерживающей пипеткой инъекционную пипетку проводят через блестящую оболочку и оолемму, затем выполняют осторожную аспирацию небольшого объёма цитоплазмы. Появление ооплазмы в инъекционной пипетке свидетельствует о нарушении целостности оолеммы и правильном расположении кончика пипетки внутри цитоплазмы; после этого сперматозоид высвобождают в ооплазму.
Таким образом, контрольная аспирация является функциональным признаком успешного проникновения в ооцит, а не этапом подготовки сперматозоидов или удаления клеток кумулюса. Денудация предназначена для удаления окружающих ооцит клеток, сепарация — для разделения клеточных популяций или отбора сперматозоидов, но ни одна из этих манипуляций не подтверждает факт внутриплазматического введения. Чрезмерная аспирация, напротив, может привести к повреждению ооцита, поэтому объём аспирируемой цитоплазмы должен быть минимальным.
| Этап ИКСИ | Основная манипуляция | Диагностическое или процедурное значение |
|---|---|---|
| Денудация ооцита | Удаление клеток кумулюса и лучистого венца | Обеспечивает визуализацию оолеммы и оценку зрелости ооцита; не подтверждает введение сперматозоида |
| Иммобилизация сперматозоида | Механическое повреждение жгутика | Снижает подвижность и уменьшает риск повреждения ооцита при инъекции |
| Аспирация сперматозоида | Захват сперматозоида в инъекционную пипетку | Подготавливает сперматозоид к переносу, но ещё не доказывает его нахождение в цитоплазме |
| Контрольная аспирация | Осторожное втягивание небольшого количества ооплазмы | Подтверждает прохождение через оолемму и нахождение кончика пипетки в цитоплазме |
| Депонирование сперматозоида | Выдавливание сперматозоида в ооплазму | Непосредственное выполнение микроинъекции после подтверждения доступа к цитоплазме |
| Извлечение пипетки | Плавное выведение инъекционной пипетки из ооцита | Завершает процедуру; оцениваются целостность ооцита и признаки травматического повреждения |
Ключевым критерием является появление небольшого количества ооплазмы в пипетке при контролируемой аспирации. Этот признак указывает на разрыв оолеммы, который необходим для доставки сперматозоида внутрь ооцита. После ИКСИ оплодотворение оценивают позднее по появлению двух пронуклеусов и двух полярных телец, поскольку сама контрольная аспирация подтверждает только технический успех введения. Соблюдение щадящей техники снижает риск лизиса ооцита и дегенерации после микроинъекции.