2) TUNEL
3) NGC
4) CGH
Система time-lapse объединяет инкубатор, встроенный микроскоп, цифровую камеру и программное обеспечение для автоматической последовательной фотосъёмки эмбрионов. Изображения получают через заданные интервалы, формируя динамический ряд или видеозапись развития, при этом эмбрионы остаются в стабильных условиях температуры, газового состава и влажности и не извлекаются из инкубатора для каждого осмотра.
Основное преимущество метода заключается в регистрации морфокинетики — временных характеристик развития эмбриона: момента оплодотворения, исчезновения пронуклеусов, начала и завершения дробления, формирования бластоцисты, а также продолжительности отдельных клеточных циклов. Такая информация позволяет выявлять задержки развития, атипичное дробление и другие признаки, которые могут быть не замечены при периодическом визуальном контроле. Морфокинетическая оценка используется как дополнительный инструмент выбора эмбрионов и не заменяет морфологическую и генетическую диагностику.
Остальные перечисленные методы не обеспечивают непрерывное получение изображений. TUNEL выявляет фрагментацию ДНК, характерную для апоптоза; CGH определяет дисбаланс хромосомного материала; NGC относится к лабораторной диагностической технологии, а не к системе автоматической видеорегистрации эмбрионов. Следовательно, именно time-lapse соответствует одновременно задачам культивирования и длительного наблюдения за развитием эмбрионов.
| Метод или система | Основной принцип | Практический результат |
|---|---|---|
| Time-lapse | Автоматическая серийная микрофотосъёмка эмбриона внутри инкубатора через заданные интервалы | Непрерывная регистрация морфокинетики и построение динамической видеозаписи развития |
| Обычный инкубатор | Поддержание температуры, влажности и газовой среды без встроенной постоянной визуализации | Культивирование эмбрионов; изображения получают только при периодическом извлечении и осмотре |
| TUNEL | Мечение свободных 3′-OH-концов фрагментированной ДНК с помощью терминальной трансферазы | Оценка апоптоза и повреждения ДНК, а не наблюдение динамики развития |
| CGH | Сравнительная гибридизация ДНК исследуемого образца и контрольного образца | Выявление потерь и приобретений участков хромосомного материала |
| NGC | Лабораторная диагностическая технология, не основанная на серийной оптической регистрации эмбриона | Получение аналитических данных, но не непрерывного изображения процесса развития |
| Морфокинетическая оценка | Анализ временных параметров клеточных делений и перехода к стадии бластоцисты | Дополнительная стратификация эмбрионов по динамике развития и потенциальному качеству |
Time-lapse-системы позволяют уменьшить число вмешательств в культуру и сохранить стабильность условий, что особенно важно для чувствительных ранних эмбрионов. Получаемые данные помогают сопоставлять морфологию с темпами и последовательностью развития. При этом прогностическая ценность отдельных морфокинетических признаков ограничена, поэтому решение о переносе принимают с учётом совокупности клинических, морфологических и генетических данных. Thus, time-lapse is a technology for continuous dynamic monitoring, not a genetic test or assay of cellular apoptosis.