2) проведения пункции фолликулов, промывки фолликулов, а также отмывки кумулюс-ооцитарных комплексов (КОКов) от фолликулярной жидкости, крови и т.д. и кратковременного нахождения в ней КОКов (+)
3) любых процедур вне инкубатора, включая пункцию фолликулов, обработку сперматозоидов и проведение микроманипуляций, таких как ИКСИ, биопсия
4) проведения пункции фолликулов, промывки фолликулов, обработки сперматозоидов и проведения ИКСИ
Среды для промывки фолликулов применяют на этапе трансвагинальной пункции ооцит-содержащих фолликулов: ими заполняют и промывают аспирационную систему, выполняют промывание фолликулов и удаляют из кумулюс-ооцитарных комплексов (КОК) фолликулярную жидкость, кровь и тканевые примеси. После этого КОК могут находиться в такой среде ограниченное время — до завершения первичной идентификации и переноса в специализированную среду для дальнейшего культивирования, созревания или оплодотворения. Поэтому правильным является вариант, предусматривающий именно кратковременное нахождение КОКов.
Формуляция этих сред поддерживает жизнеспособность ооцита и клеток кумулюса во время манипуляций вне инкубатора. В их состав обычно входят сбалансированные соли, источник энергии, белковый компонент, например альбумин или его синтетический заменитель, а также буферная система HEPES или MOPS, обеспечивающая относительно стабильный pH при работе вне газовой среды инкубатора. Однако такая среда не рассчитана на длительное поддержание метаболизма, мейотического созревания или развития эмбриона; продолжительная экспозиция повышает риск нарушений pH, температуры, осмолярности и энергетического обмена.
Другие этапы ВРТ требуют специализированных сред с иными физико-химическими характеристиками. Среды для обработки сперматозоидов оптимизированы для центрифугирования и восстановления подвижных клеток, среды для ИКСИ — для безопасного выполнения микроманипуляции, а среды для культивирования эмбрионов — для длительного развития от зиготы до стадии бластоцисты. Поэтому среда для промывки фолликулов не предназначена для любых процедур вне инкубатора и не заменяет среды для обработки спермы, оплодотворения или биопсии.
| Этап или тип среды | Основная задача | Допустимое время контакта | Ключевые особенности |
|---|---|---|---|
| Среда для промывки фолликулов | Промывание фолликула и аспирационной системы, удаление крови и фолликулярной жидкости с поверхности КОК | Кратковременно, до идентификации и переноса КОК | Изотоничность, буферная емкость, белковый компонент, поддержание жизнеспособности при манипуляциях |
| Среда кратковременного удержания ооцитов | Временное размещение КОК во время поиска, оценки и сортировки | Минуты, с минимизацией периода вне оптимальных условий | Стабильный pH и осмолярность; не обеспечивает полноценное созревание ооцита |
| Среда для созревания ооцитов in vitro | Поддержка ядерного и цитоплазматического созревания незрелых ооцитов | Продолжительно, обычно в условиях инкубатора | Содержит компоненты, необходимые для метаболизма и регуляции мейоза; не является средой для промывки |
| Среда для оплодотворения и ИКСИ | Обеспечение контакта гамет или выполнения инъекции сперматозоида в ооцит | Ограниченное время процедуры | Подбирается с учетом вязкости, содержания белка и совместимости с гаметами |
| Среда для обработки сперматозоидов | Отмывание семенной плазмы, концентрирование и селекция подвижных сперматозоидов | На период лабораторной обработки | Рассчитана на свойства сперматозоидов и центрифугирование, а не на сохранение КОК |
| Среда для культивирования эмбрионов | Поддержка развития зиготы, дробления и формирования бластоцисты | От нескольких суток до переноса или витрификации | Содержит оптимизированные субстраты и буферы для длительного эмбрионального развития |
| Среда для биопсии и других микроманипуляций | Кратковременная стабилизация ооцита или эмбриона во время манипуляции | Только на время процедуры | Обеспечивает подходящие условия для работы вне инкубатора, но не заменяет полноценное культивирование |
Ключевым критерием выбора является соответствие среды конкретному этапу работы и продолжительности экспозиции. При пункции необходимо поддерживать температуру и использовать среду согласно инструкции производителя и лабораторному протоколу. КОК после промывания следует как можно быстрее перевести в среду, предназначенную для последующего этапа ВРТ. Таким образом, отмеченный вариант отражает функциональное назначение и ограничения сред для промывки фолликулов.