2) повышения подвижности сперматозоидов
3) полного обездвиживания сперматозоидов
4) снижения подвижности сперматозоидов
Кумулаза предназначена для ферментативного удаления клеток кумулюса и лучистого венца с поверхности ооцита. Препарат содержит гиалуронидазу, которая расщепляет гиалуронан и другие компоненты межклеточного матрикса, обеспечивающего сцепление клеток кумулюса с ооцитом. После ферментативного разрыхления комплекса выполняют осторожную механическую денудацию в пипетке.
Удаление клеток кумулюса особенно необходимо перед проведением интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ): оно позволяет визуально оценить зрелость ооцита, наличие первого полярного тельца и корректно выбрать место инъекции. В стандартном оплодотворении in vitro комплекс ооцит — кумулюс может сохраняться дольше, поскольку клетки кумулюса участвуют в физиологическом взаимодействии ооцита со сперматозоидами. Кумулаза не является средством для стимуляции, снижения или полного подавления подвижности сперматозоидов; эти задачи решаются отдельными методами обработки эякулята.
| Объект или этап | Основной механизм | Практическое значение |
|---|---|---|
| Клетки кумулюса | Формируют клеточный слой вокруг ооцита и связаны гиалуронан-содержащим матриксом | Подлежат удалению перед детальной оценкой ооцита и выполнением ИКСИ |
| Лучистый венец | Наиболее внутренний слой фолликулярных клеток, непосредственно прилежащий к прозрачной оболочке | Удаляется вместе с комплексом кумулюса при ферментативной денудации |
| Кумулаза | Гиалуронидаза разрушает гиалуронановый межклеточный матрикс | Облегчает отделение клеток кумулюса и лучистого венца от ооцита |
| Механическая денудация | Остаточные клетки удаляются осторожным перемещением ооцита через денудационную пипетку | Завершает обработку после ферментативного разрыхления комплекса |
| Оценка зрелости ооцита | После удаления окружающих клеток визуализируется первое полярное тельце | Наличие первого полярного тельца обычно соответствует стадии метафазы II и пригодности ооцита для ИКСИ |
| Подвижность сперматозоидов | Определяется качеством эякулята и методами его обработки, а не действием кумулазы | Кумулаза не используется для повышения, снижения или полного обездвиживания сперматозоидов |
Продолжительность контакта ооцита с ферментом и интенсивность последующей механической обработки должны соответствовать инструкции к препарату и лабораторному протоколу. Избыточная денудация или грубое пипетирование могут повреждать плазматическую мембрану и прозрачную оболочку ооцита. После обработки ооцит переносят в чистую культуральную среду, чтобы удалить остатки фермента. Таким образом, применение кумулазы относится к подготовке ооцита, а не к коррекции функциональных характеристик сперматозоидов.