2) удельному весу и морфологии клеток
3) удельному весу и плотности (+)
4) плотности и морфологии клеток
Центрифугирование обеспечивает разделение компонентов эякулята за счёт различий их физических характеристик — прежде всего плотности и удельного веса относительно окружающей среды. Под действием центробежной силы более плотные элементы, включая сперматозоиды и клеточные примеси, перемещаются к дну пробирки и образуют осадок, тогда как менее плотные компоненты семенной плазмы остаются в надосадочной жидкости. Скорость осаждения зависит также от режима центрифугирования, вязкости среды и продолжительности воздействия.
Морфология сперматозоидов не является непосредственным принципом такого разделения: она оценивается микроскопически после приготовления препарата или влияет на эффективность отбора лишь косвенно. При градиентном центрифугировании сперматозоиды перемещаются через слои среды различной плотности, что позволяет обогатить образец прогрессивно подвижными клетками и уменьшить содержание лейкоцитов, эпителиальных клеток, клеточного детрита и неподвижных сперматозоидов. Метод широко применяется при подготовке спермы для внутриматочной инсеминации и программ вспомогательных репродуктивных технологий.
| Метод обработки эякулята | Основной принцип | Преимущественно отбираемые компоненты | Клиническое применение |
|---|---|---|---|
| Простое центрифугирование | Осаждение частиц в зависимости от плотности и удельного веса | Сперматозоиды и другие клеточные элементы | Концентрирование клеток, подготовка осадка к исследованию |
| Центрифугирование в градиенте плотности | Прохождение клеток через слои среды с различной плотностью | Преимущественно подвижные и функционально полноценные сперматозоиды | Подготовка к инсеминации, ЭКО и ИКСИ |
| Метод swim-up | Самостоятельная миграция подвижных сперматозоидов в верхний слой среды | Прогрессивно подвижные сперматозоиды | Обработка образцов с удовлетворительными показателями спермограммы |
| Микроскопическая морфологическая оценка | Визуальное исследование строения головки, шейки и хвоста | Нормальные и патологические формы сперматозоидов | Диагностика тератозооспермии; не является методом физического разделения |
| Фильтрационные методы | Разделение по способности клеток проходить через пористый материал | Подвижные клетки с меньшим количеством примесей | Дополнительная очистка эякулята |
| Магнитно-активированная сортировка | Удаление клеток, несущих маркеры апоптоза | Сперматозоиды без выраженных признаков апоптотического повреждения | Дополнительная селекция в отдельных программах ВРТ |
Выбор способа обработки определяется объёмом эякулята, концентрацией, подвижностью сперматозоидов и количеством клеточных примесей. Чрезмерная скорость или продолжительность центрифугирования может усиливать образование активных форм кислорода и повреждать мембраны сперматозоидов. Поэтому параметры процедуры стандартизируют, а качество полученной фракции контролируют по концентрации, прогрессивной подвижности и жизнеспособности клеток. Морфологическую оценку проводят отдельно и используют как дополнительный показатель репродуктивного потенциала образца.